щають в скляну пробку пробірку центрифуги, додають 30 мл розведеного метанолі (3: 5), струшують протягом 15 хвилин, центрифугують, і відокремлюють верхній шар рідини.- Повторюють процедуру з залишку з 15 мл розведеного метанолі (3: 5), об'єднують надосадову рідину, додають розбавлений метанолом (3: 5), до 50 мл.- Внесуть 10 мл цього розчину, додають 3 мл розведеного гідроксиду натрію TS, дати постояти протягом 30 хвилин, додають 3 мл 0,1 М соляної кислоти TS і розбавленого метанолу (3: 5), до 20 мл. Розчин сравненія3,0 мг панаксозидов Rg1 Р, 3,0 мг панаксозидов Re Р, 3,0 мг панаксозидов Rf Р і 3,0 мг панаксозидов Rb1 Р розчиняють у метанолі Р і доводять до обсягу 10,0 мл цим же растворітелем.10 мг панаксозидов Rg1 РС розчиняють у метанолі (3: 5), до 100 мл і використовують цей розчин в якості стандартного розчину. Виконайте перевірку з 10 мл раствора.Условія хроматографирования · спектрофотометрический детектор: довжина хвилі 203 нм. · Колонка: довжиною 0,125 м і внутрішнім діаметром 4,6 мм, заповнена силікагелем октадецілсілільним для хроматографії Р з розміром частинок 5 мкм. · Температура: 35 ° С. · Рухома фаза: o Рухома фаза А: вода Р, доведена кислотою фосфорної Р до рН 2. o Рухома фаза B: ацетонітрил Р. · Швидкість рухомої фази: 1,0 мл/хв. · Час врівноваження системи: 20 хв перед кожним введенням. · Обсяг введеної проби: 20 мкл. Порядок виходу піків: панаксозидов Rg1, панаксозидов Re, панаксозидов Rf і панаксозидов Rb1. Придатність хроматографічної системи: розчин порівняння. · Детектор: ультрафіолетовий спектрофотометр (довжина хвилі: 203 нм). · Колонка: довжиною 0,15 м і внутрішнім діаметром 4,6 мм, заповнена силікагелем октадецілсілільним для хроматографії Р з розміром частинок 5 мкм. · Температура: постійна температура близько 30 ° С. · Рухома фаза: суміш води і ацетонітрилу (4: 1). · Час утримування панаксозидов Rg1: близько 25 хвилин. · Придатність Системи: o Продуктивність системи: Розчиніть 1 мг панаксозидов RG1 РС і 1 мг панаксозидов Re в розбавленому метанолі (3: 5) до 10 мл. Процедура виконується з 10 мл цього розчину. o Відтворюваність системи: Випробування повторюють 6 разів з 10 мл стандартного розчину.
Результати ГФ РБ і БФ: Дозвіл між піками панаксозидов Rg1 і панаксозидов Re не менше 1,0. (малюнок 2.4)
Зміст панаксозидов Rg1 і панаксозидов Rb1 у відсотках розраховують за формулою 2.3
де: - площа піку панаксозидов Rb1 на хроматограмі випробуваного розчину; - площа піку панаксозидов Rg1 на хроматограмі випробуваного розчину; - площа піку панаксозидов Rb1 на хроматограмі розчину порівняння; - площа піку панаксозидов Rg1 на хроматограмі розчину порівняння;- маса наважки випробуваного сировини, г; - маса наважки панаксозидов Rb1 в розчині порівняння, мг; - маса наважки панаксозидов Rg1 в розчині порівняння, мг;
Р1 - зміст панаксозидов Rb1 в реактиве,%;
Р2 - зміст панаксозидов Rg1 в реактиве,%.
Результати ЯФ: панаксозидов Rg1 і панаксозидов Re елюіруют з дозволом між цими піками становить не менше 1,5.
Відносне стандартне відхилення площі піка панаксозидов Rg1 становить не більше 1,5%.
Зміст панаксозидов Rg1 розраховують за формулою 2.4
Де:
MS - Кількість (мг) панаксозидов Rg1 RS, у розрахунку на безводну основу.
AT - площа піку панаксозидов Rg1 на хроматограмі випробуваного розчину. S - площа піку панаксозидов Rg1 на хроматограмі розчину порівняння.
Визначення вмісту суми панаксозидов Rb1
На відміну від БФ, ГФ РБ і ЯФ мали додаткове визначення вмісту суми панаксозидов Rb1. І точно також обидва методики приготували різні випробовувані розчини, різні розчини порівняння і різні рухливі фази, і природно мали різні результати. (таблиця 2.8)
Таблиця 2.8 - Визначення вмісту суми панаксозидов Rb1. Рідка хроматографія. (2)
ГФ РБЯФраствор А1,0 г подрібненої сировини поміщають в колбу зі шліфом місткістю 250 мл, додають 50,0 мл спирту (40%) Р, зважують з точністю до 0,01 м і нагрівають із зворотним холодильником в водяній бані протягом 60 хв. Охолоджують, доводять масу до первісної спиртом (40%) Р і фільтруют.10 мг панаксозидов Rb1 RS, розчиняють в розбавленому метанолі (3: 5) до 100 мл.Іспитуемий раствор2,0 мл розчину А поміщають в колбу зі шліфом місткістю 50 мл, додають 1,0 мл розчину 50 г./л кислоти фосфорномолібденовой Р в 96% спирті Р, 10 мл води Р і нагрівають зі зворотним холодильником у водяній бані протягом 2:00. Швидко охолоджують до кімнатної температури. Отриманий розчин кількісно переносять у мірну колбу місткістю 50 мл, використовуючи воду Р, і доводять до обсягу 50,0 мл цим же растворітелем.Іспользуйте зразок розчи...
