аного, як у саліцину, реакції проводять після попереднього гідролізу глікозиду кислотами або ферментами. Ці ж якісні реакції використовують для виявлення фенольних глікозидів на хроматограмах.
У разі хроматографирования в тонкому шарі силікагелю хроматограми можна обробити крім перерахованих реактивів ще й 4% - ної Н2SO4 в абсолютному етиловому спирті.
При цьому фенольні глікозиди в залежності від будови виявляються вигляді жовтих, червоних, помаранчевих і блакитних плям.
При обробці хроматограм розчином нітрату срібла і лугом фенольні глікозиди виявляються у вигляді коричневих плям з різними відтінком.
При обробці хроматограм реактивом Паулі фенольні глікозиди в залежності від будови проявляються у вигляді жовтих, оранжевих або червоних плям.
Методики виявлення арбутина в листках мучниці і брусниці.
. 5 г подрібненої сировини кип'ятять з 10 мл Н2О 2-3 хвилини і після охолодження фільтрують. До 1 мл фільтрату додають кристалик сульфату закисного Fe, рідина забарвлюється спочатку в бузковий, потім темно- фіолетовий колір, і нарешті, утворюється темно- фіолетовий осад (арбутин).
До 1 мл фільтрату (у фарфоровій чашці) додаємо 4 мл розчину аміаку і 1 мл 10% розчину Na фосфорно - молибденовокислого в 10% - ної HCl; з'являється синє забарвлення (арбутин). Реакція заснована на утворенні комплексної сполуки синього кольору.
. 5 г мелкоізмельченного рослинної сировини заливають 5 мл етилового спирту і екстрагують при періодичному струшуванні і слабкому нагріванні на водяній бані протягом 1:00. Отримане витяг за допомогою капіляра наносять на папір (3-4 дотику капіляра) і хроматографіруют висхідним способом в 5% - ної оцтової кислоті до проходження фронту розчинника 15-17 см (хроматограмма проходить протягом 1:00 при використанні паперу FN - 3). Хроматограму виймають, висушують, обробляють розчином 10% - ної спиртової лугу і потім реактивом Паулі. Арбутин має найвище значення R=0.75, відокремлюється від супутніх глікозидів і проявляються у вигляді яскраво-червоної плями (рис. 1.6.1). Аналогічні результати можна отримати на платівці Силуфол при хроматографування в системі хлороформ-етиловий спирт (7: 3) з подальшою обробкою розчином лугу і реактивом Паулі. Хроматограми до і після обробки реактивами доцільно переглядати в УФ світлі з метою ідентифікації сировини по окремих компонентах
На салідрозід (сировина родіоли рожевої):
реакція азосочетания з диазотированного Сульфацилу натрію з
освітою азокрасителя вишнево-червоного кольору (рис. 1.6.2). [8]
Згідно ГФ РБ і Європейській Фармакопеї [5, 24] ідентифікацію фенольних глікозидів в листках мучниці проводять методом тонкошарової хроматографії. До 0.5 г. подрібненої сировини додають 5 мл суміші з рівних обсягів метанолу та води, нагрівають зі зворотним холодильником протягом 10 хвилин. Гаряче витяг фільтрують. Фільтр промивають сумішшю з рівних обсягів метанолу та води і доводять до обсягу 5 мл цим же розчинником.
В якості розчину порівняння використовують 25 мг арбутина, 25 мг галової кислоти і 25 мг гідрохінону розчиняють у метанолі і доводять до обсягу 10,0 мл цим же розчинником.
Платівка: ТШХ пластинка із шаром силікагелю.
Рухома фаза: кислота мурашина безводна-вода-етилацетат (6: 6: 88 об/об/об).
Заподіювана обсяг проби: 10 мкл розчину порівняння і 20 мкл випробуваного розчину у вигляді смуг.
Фронт рухомої фази: не менше 15 см від лінії старту.
Висушування: при температурі від 105 до 110 С до зникнення запаху розчинників.
Прояв: пластинку обприскують розчином 10 г/л діхлорінохлоріміда в метанолі. Потім обприскують розчином 20 г/л натрію карбонату безводного. Переглядають при денному світлі.
Згідно ГФ РБ [18] ідентифікацію арбутина в листі брусниці проводять наступним чином.
Випробуваний розчин. До 0,5 г подрібненої сировини додають 5 мл суміші з метанолу та води (50:50, об/об) і кип'ятять із зворотним холодильником водяній бані протягом 10 хв. Гаряче витяг фільтрують. Фільтр і пробірку промивають сумішшю з метанолу та води (50:50, об/об) і доводять до обсягу 5 мл цим же розчинником.
Розчин порівняння. 2,5 мг арбутина розчиняють у 5 мл метанолу.
Платівка. ТШХ пластинка із шаром силікагелю GР.
Рухома фаза: етилацетат - кислота мурашина безводна - вода (44: 3: 3, об/об/об).
Заподіювана об'єм проби: по 10 мкл у вигляді смуг.
Фронт рухомої фази: не менше 15 см від лінії старту.
