Визначення білкових фракцій сироватки крові методом електрофорезу на ацетатцеллюлозное плівці. Буферний розчин призначено електрофоретичного розділення білків сироватки крові на мембранах з ацетатцеллюлози з наступним денситометрическое визначенням білкових фракцій.
ПРИНЦИП МЕТОДУ
Принцип електрофоретичного розділення білків заснований на різній швидкості руху молекул білків сироватки крові в постійному електричному полі певної напруженості. Розділені білкові фракції фарбуються барвником. Інтенсивність забарвлення білкових фракцій пропорційна їх кількості. p> аналізованому зразку
Сироватка крові, вільна від гемолізу, ліпемії і не жовтянична. Білкові фракції сироватки крові стабільні в щільно закритій пробірці при 18-25 протягом 8 годин, при 2-8 - у протягом 3 днів, при 20 - протягом 1 місяця.
ПРОВЕДЕННЯ АНАЛІЗУ
1. Проведення електрофорезу
1.1. сухі мембрани обережно покласти на поверхню буфера для електрофорезу, уникаючи швидкого їх занурення, і витримати до повного змочування. Змочені мембрани акуратно промокнути між листами щільного фільтрувального паперу, не допускаючи їх висихання. Перед нанесенням зразків бажано провести фазу префореза. Для цього мембрану слід помістити в камеру для електрофорезу і включити струм в вибраному режимі на 10 хвилин. Фазу префореза можна замінити тривалим замочуванням мембрани в розчині буфера (кілька годин).
1.2. за допомогою аплікатора нанести аналізовані зразки сироватки крові на відстані 2-3 см від катодного краю мембрани. Мембрану помістити в електрофоретична камеру і підключити струм.
2. Обробка електрофореграми
2.1. барвник Гранатовий С.
Після відключення струму мембрану обережно перенести в розчин барвника на 3-5 хвилин, потім двічі на 3 хвилини в 5-7% розчин оцтової кислоти (до відбілювання фону). p> 1.2. електрофореграмме обробити за допомогою сканера і комп'ютерної програми.
4. Тимоловая проба
Принцип методу:
Сироваткові бета-глобуліни, гамма-глобуліни і ліпопротеїни осідають при рН 7.55 тимоловим реактивом. Залежно від кількості та взаємного відношення білкових фракцій при реакції виникає помутніння, інтенсивність якого вимірюють турбідиметрично.
Клініко-діагностичне значення:
Тимолова проба більш придатна для функціонального дослідження печінки, ніж колоїдно-стійкі проби. Вважають що вона позитивна в 90-100% випадків хвороби Боткіна (вже в преджелтушного її стадії і при безжовтяничній формі) і при токсичному гепатиті. Реакція позитивна при послегепатітном і постнекротіческом, особливо желтушном цирозі (на відміну від інших форм цирозів), при колагенових захворюваннях, малярії та вірусних інфекціях. При механічній жовтяниці вона (на 75% випадків) негативна, що має диференційно-діагностичне значення.
При механічної жовтяниці проба стає позитивною лише у випадку, якщо процес ускладнюється паренхіматоз...
