но прискорило впровадження рідинної хроматографії в біологію, біотехнологію, медицину.
Проведені роботи з розвитку мікроколоночной ВЕРХ, спрямовані на подальшу мініатюризацію колонок, очевидно, є перспективними і потрібними, проте їх освоєння та впровадження в практику у великій мірі стримується технічними труднощами. Описано капілярні колонки для ВЕРХ з внутрішнім діаметром близько 5 і 10 мкм, в тому числі і з прищепленими фазами, що дозволили отримати ефективність до декількох мільйонів т.т.; описані колонки з прищепленими сорбентами, що мають внутрішній діаметр близько 30-50 мкм, також дозволили отримати ефективність близько мільйона т.т. Однак введення проб в такі колонки, особливо кількісний, стабільна подача розчинників з витратою 0,01-1 мкл/хв при тисках 10-40 МПа, нарешті, створення детекторів з об'ємом кювети в 1-20 нл, що дають високу чутливість, - все це тільки частина серйозних проблем, вирішити які належить надалі. Зараз можна передбачити, що в найближчі 5-10 років мікроколоночние хроматографи з колонками діаметром 0,2-2 мм знайдуть саме широке застосування в аналітичній практиці, хоча і не стануть найбільш масовими.
Які ж основні відмінності апаратури для мікроколоночной ВЕРХ від звичайної? Насос повинен стабільно подавати розчинник при високих тисках (5-40 МПа) і невеликих витратах (0,1-100 мкл/хв). Як правило, звичайні насоси для ВЕРХ або не працюють за таких параметрах, або не забезпечують стабільної подачі. Інжектор повинен забезпечувати відтворений введення проб розміром 0,1-1 мкл при високих тисках (до 40 МПа), що так само не вдається здійснити, використовуючи старі петльові інжектори з петлями 10 мкл і більше. Для з'єднання колонки з інжектором і детектором доводиться йти або на пряме з'єднання без використання капілярів, або використовувати капіляри з внутрішнім діаметром 50-150 мкм дуже невеликої довжини (2-5 см). Нарешті, детектор повинен мати кювету дуже малого об'єму (0,03-1 мкл), але забезпечує високу чутливість детектування (для УФ детекторів довжина оптичного шляху повинна бути від 1 до 10 мм). Для градієнтної мікроколоночной ВЕРХ додатково виникають труднощі, пов'язані з мікроподачі елюенту на початку і наприкінці градієнта (від 1% звичайного витрати для микроколонки) і створенням ефективного мікросмесітеля місткістю від 1 до 20 мкл. Досить проблематичним стає формування градієнта одним насосом і системою клапанів на стороні низького тиску, тому що пристрій такого типу з місткістю 10-40 мкл (включаючи обсяги клапанної системи, підвідних капілярів і поршневий камери або камер насоса) дуже важко уявити.
Які основні проблеми в Нині існують в мікроколоночной хроматографії? По-перше, це трудність приготування високоефективних колонок з внутрішнім діаметром 0,5-2 мм з широким діапазоном сорбентів всіх типів. По-друге, існує обмежений коло детекторів з мікрокювет місткістю 0,03-2 мкл, придатних для роботи з микроколонки, які серійно виробляють в досить широкому масшта...
