ні до цієї крові (NH4) 2S відновлення не відбувається. Дві смуги поглинання не зникають. Це говорить про високу хімічної стійкості карбоксигемоглобина. Однак між цими чітко вираженими смугами часто з'являється невелике затемнення за рахунок того, що непов'язаний з оксидом вуглецю (II) оксигемоглобін відновлюється до гемоглобіну.
Спектрофотометричне визначення карбоксигемоглобіну
За своєю сутністю цей метод можна віднести до диференціальної фотометрії.
У крові людей і тварин гемоглобін міститься у вигляді дезоксигемоглобина (Нb) і оксигемоглобіну (Нb02) - продукту взаємодії гемоглобіну з киснем. У крові може міститися також невелика кількість метгемоглобіну (MtHb).
При надходженні в організм оксиду вуглецю (II) відбувається утворення карбоксигемоглобіну за рахунок оксигемоглобіну і дезоксигемоглобина. Метгемоглобін з оксидом вуглецю (II) не зв'язується. Всі зазначені сполуки мають характерні спектри поглинання в області 450-620 нм.
Метод визначення карбоксигемоглобіну заснований на тому, що при взаємодії з відновниками (дітіонатом натрію, сульфідом амонію) всі з'єднання гемоглобіну (MtHb, Нb02) за винятком карбоксигемоглобина (СОНb) відновлюються до дезоксигемоглобина.
Спектр поглинання дезоксигемоглобина має одну смугу поглинання з максимумом при 557 нм. Карбоксигемоглобин не відновлюється, і його спектр поглинання зберігається. Це видно з представлених спектрів поглинання проб крові (див. рис. 3).
Методика визначення карбоксигемоглобіну (ВООЗ, Женева, 1998) полягає в наступному. Для аналізу досліджувану кров ділять на 3 частини. Одну частину (А) залишають без зміни, друга частина (В) насичують оксидом вуглецю до 100% вмісту СОНb і використовують як стандарт, третю частину (С) насичують киснем до повного витіснення СО, тобто отримують 100% оксигемоглобіну.
Рис. 3. Спектри поглинання проб крові: А - досліджувана кров, що містить дезокси-і карбоксигемоглобин; В - проба крові, що містить 100% НbСО; С - проба крові, що містить дезоксигемоглобин.
До кожної з трьох проб додають відновник дітіонат натрію - Na2S2O42Н20. Реєструють спектри поглинання всіх трьох розчинів в області 500-620 нм і вимірюють значення оптичної щільності А при 540 і 579 нм (ізобестіческая точка).
Розрахунок вмісту карбоксигемоглобіну ведуть по величині відношення оптичної щільності А540/А579. Знаходять ставлення А540/А579 для розчинів А, В і С. Ці відносини підставляють у формулу:
Цей метод ефективний при дослідженні крові, що містить більше 10% карбоксигемоглобіну. Фізіологічна норма вмісту карбоксигемоглобіну в крові становить від 1,5 до 3,1%, для курців - <10%. Смертельна концентрація карбоксигемоглобіну в крові становить у середньому - 60% і може коливатися в залежності від зовнішніх умов і особливостей організму від 40 до 80%.
Визначення оксиду вуглецю (II) в повітрі
-й спосіб. Для виявлення оксиду вуглецю (II) в повітрі використовують його здатність поглинатися кров'ю тварини. З цією метою 20 л повітря прокачують за допомогою аспіратора спочатку через ряд склянок Тищенко з суспензією гідроксиду заліза (II) з метою зв'язування кисню, а потім через 5 мл розведеної крові тварини. Отриману кров аналізують спектрофотометричним методом.
-й спосіб. Метод заснований на окисленні оксиду вуглецю (II) оксидом йоду (V) до оксиду вуглецю (IV). Досліджуваний об'єм ...
