, лише зрідка стикаючись з його волокнами. У цьому випадку рухливість лінійних молекул ДНК виявляється обернено пропорційною логарифму їх молекулярної маси, а, отже, і розміром.
Електрофорез ДНК
Електрофорез ДНК - це аналітичний метод, застосовуваний для розділення фрагментів ДНК за розміром (довжині) і формі (у випадку, якщо ДНК утворює вторинні структури, наприклад шпильки). Сили електричного поля, що прикладається до зразків, змушують фрагменти ДНК мігрувати через гель. Сахарофосфатний остов молекул ДНК заряджений негативно і тому ланцюга ДНК рухаються від катода, зарядженого негативно, до позитивного аноду. Довші молекули мігрують повільніше, оскільки затримуються в гелі, коротші молекули рухаються швидше.
До зразків зазвичай додають низькомолекулярний кислий барвник (наприклад, динітрофенол, бромфеноловий синій), щоб візуалізувати хід електрофорезу в процесі. Барвник також необхідний для того, щоб визначити, коли варто зупинити процес.
Електрофорез проводиться в камері, заповненої буферним розчином. Найчастіше використовуються буфери, що містять ЕДТА, трис і борну кислоту. Буфер необхідний для підвищення іонної сили розчину, в якому відбуватиметься поділ молекул ДНК під дією прикладеного електричного поля.
Після поділу (іноді барвник вносять в розплавлену агарозу) фрагменти ДНК різної довжини візуалізують за допомогою флюоресцентних барвників, специфічно взаємодіють з ДНК, наприклад, агарозній гелі зазвичай фарбують бромистим етидієм, який інтеркалірует між азотистими підставами дуплексу і флюоресцирует в УФ-променях.
Визначення розмірів виробляють шляхом порівняння комерційно доступних фрагментів ДНК, що містить лінійні фрагменти ДНК відомої довжини.
Для електрофоретичного аналізу ДНК зазвичай використовують агарозній (для відносно довгих молекул ДНК) і поліакриламідні (для високого дозволу коротких молекул ДНК, наприклад, у випадку секвенування) гелі.
Іммуноелектрофорез
Іммуноелектрофорез (ІЕФ) - метод дослідження антигенного складу біологічних матеріалів, що поєднує електрофорез і іммунодіффузія. Вперше описаний Грабар та Вільямсом в 1953 році, в 1965 році метод був модифікований Шейдеггером з метою мінімізації.
Зразок антигенного матеріалу поділяють електрофорезом в гелі (зазвичай агарозном), в результаті чого формуються характерні зони. Далі паралельно зонам електрофорезу вноситься Преципітуючих антисироватка, антигени і антисироватка дифундують назустріч один до одного, і в місці зустрічі антисироватки з антигеном з'являються лінії преципітації, що мають форму дуги. Після проведення иммунодиффузии і елюювання непреціпітіровавшіх молекул з гелю гель забарвлюють спеціальними барвниками (наприклад амідочёрним 10В, азокарміном В і іншими барвниками, фарбуючими білки у разі білкових антигенів або суданом чорним в разі ліпопротеїнових антигенів). Існує також ряд модифікацій методу ІЕФ (за допомогою чистого антигену, за допомогою моноспеціфіческой антисироватки, метод ІЕФ по Оссерману, метод ІЕФ по Геремансу.
