ь багатокомпонентні мікробні асоціації.
Процес метанобразованія відрізняється високою ефективністю: до 90 - 95% використовуваного вуглецю переходить в метан. Тому метаногенна асоціації з успіхом застосовують для очищення стічних вод від органічних забруднень з одночасним отриманням висококалорійного палива. Використання біомаси як джерела палива відкриває певні перспективи вирішення проблеми енергетики та охорони навколишнього середовища [1].
Також термофільні бактерії здавна застосовуються для очищення стічних вод. Інтерес до метанового бродіння різко зріс, коли була виявлена ??здатність бактерій продукувати вітамін В 12. В. Н. Букін показав можливість отримання цього цінного вітаміну при зброджуванні термофільними метановими бактеріями ацетоно-бутиловой барди. Одночасно може бути зібраний виділяється при цьому метан (10- 20 м 3 на 1 м 3 сброженной рідини) [3].
6. Методи досліджень
Для переважного розвитку, росту, виділення і очищення метаногенов використовують середу наступного складу (г/л): KH 2 PO 4 - 0,38; Na 2 HPO 4 - 0,53; NH 4 Cl - 0,30; NaCl - 0,30; CaCl 2 * 2H 2 O - 0,11; MgCl 2 * 6H 2 O - 0,10; резазуріна - 0,001 (індикатор відновних умов), розчин мікроелементів - 1,0 мл/л; розчин вітамінів - 0,5 мл/л.
Кінцева концентрація мікроелементів в середовищі повинна скласти (мг/л): FeCl 2 * 4H 2 O - 0,944; H 3 BO 3 - 0,062; CuCl 2 - 0,013; MnCl 2 * 4H 2 O - 0,061; CoCl 2 * 6H 2 O - 0,066; NiOH - 0,400; ZnCl 2 - 0,068; Na 2 SeO 3 - 0,017; NaWO 4 - 0,029; Na 2 MoO 4 - 0,021.
Кінцева концентрація вітамінів в середовищі повинна становити (мг/л): біотин - 0,01; фолієва кислота - 0,01; нікотинамід - 0,10; n-аміобензойная кислота - 0,05; тіамін - 0,10; пантотенова кислота - 0,05, піридоксамін - 0,25; цианкобаламин - 0,05; рибофлавін - 0,05.
Мінеральну середу кип'ятять для позбавлення від кисню, потім охолоджують до кімнатної температури і розливають під струмом азоту (вільного від кисню) для запобігання дифузії кисню в середу. Середовища розливають у флакони, закривають гумовими пробками і затискають алюмінієвими ковпачками. Потім газову фазу замінюють на необхідну. Кінцевий тиск у флаконах становить - 1,6 атм. Середовища стерилізують автоклавуванням, а розчин вітамінів - фільтруванням. Після стерилізації в середу додають розчин Na 2 S до кінцевої концентрації 278мг/л, вітаміни, а також необхідну кількість стерильного субстрату.
Всі пересівання мікроорганізмів здійснюють за допомогою стерильних шприців, не порушуючи умов анаеробіозу.
Для виділення і кількісного обліку метанобразующих бактерій в щільних середовищах найбільшого поширення набули посіви в обертових пробірках. Повністю підготовлені пробірки з середовищем стерилізують, і розплавлений агар поміщають у водяну баню. У такій агар виробляють посів розведень грунтової суспензії. Пробірки обертають вручну або в спеціальному обертовому затиску. Пробірку з застиглим агаром знімають і зберігають у вертикальному положенні, так як скупчується конденсат може змити посів.
Виділення чистих культур метаногенов виробляють методом розсіву активних накопичувальних культур на агаризованими середовища в чашках Петрі в анаеробному боксі. Чисті культури можуть бути також отримані при виділенні окремих колоній, що виростають в обертових пробірках по Хангейту. Виділення також слід проводити в анаеробному боксі. Перевірку чистоти культур метанобразующих бактерій слід проводити дуже ретельно. Микроскопирование культур на різних стадіях росту дає цінну вказівку на однорідність культури. Перевірку також проводять шляхом розсіву на тверді середовища в анаеробних умовах. Матеріал беруть з окремих колоній за допомогою мікробіологічної петлі і здійснюють поверхневий посів на середовище в чашках Петрі. При глибинному посіві з розплавленої агаризованому середовища стерильним шприцом вносять сусло клітин з окремої колонії, приготовану в стерильному анаеробному розчині. Свідченням чистоти культури є однорідність колоній і збіг їх ознак з описаними раніше. Крім звичайних середовищ для банальної мікрофлори необхідно перевіряти культури на присутність сульфатредуцирующих бактерій - частих супутників метанобразующих бактерій. Крім того, можлива присутність анаеробів зі своєрідним обміном, що беруть участь в сінтрофних асоціаціях з метанобразующих бактеріями. Особливо жорсткі вимоги до чистоти культури пред'являються в тому випадку, коли досліджують використання метанобразующих бактеріями іншого субстрату, ніж водень-вуглекислотна суміш [2].
Висновок
Входження метаногенов до складу археобактерій вказує на їх прадавнє походження. Дані про склад атмосфери первісної землі дозволяють припустит...
