льна та ін. Рідини) аліквотіруют і зберігають до аналізу при - 25 o C.
Активність інгібіторів/активаторів синтезу ІФН у фізіологічних рідинах визначають наступним чином: у індукційну систему контрольних проб, аналогічну такої для оцінки індукованої продукції ІФН, вносять стандартні індуктори ІФН -? /? і ІФН -? (NDV і СЕА відповідно) і, замість цільної крові, клітини лінії Namalva (до концентрації 106 кл/мл) в еквівалентному обсязі. Досвідчені проби, крім цього, містять розтитрованою зразки досліджуваних фізіологічних рідин. Індукцію синтезу ІФН проводять при тих же умовах і кількісних співвідношеннях компонентів, як при визначенні індукції ІФН -? /? і ІФН -? лейкоцитами in vitro. За співвідношенням активностей ІФН у дослідних і контрольних пробах визначають активність інгібіторів/активаторів синтезу ІФН в досліджуваних зразках як коефіцієнт стимуляції/інгібування синтезу ІФН in vitro. Після індукції проби заморожуються і зберігаються до аналізу при - 25oC.
Визначення чутливості природних потенційних продуцентів ІФН (лейкоцити крові) до застосовуваних в медичній практиці і експериментальним лікарським препаратам проводиться при тих же умовах, як і визначення індукованої продукції ІФН лейкоцитами in vitro. При цьому, замість стандартних індукторів ІФН (NDV і СЕА) використовують препарати, чутливість до яких визначають. Оцінюють вплив цікавить препарату на процеси продукції ІФН клітинами донора in vitro. Чутливість до препарату вважають позитивною, якщо активність ІФН в пробі на чутливість в 1.5 і більше рази вище загальної активності спонтанно-продуцируемого лейкоцитами ІФН. Методично даний тест повторює тест на індуковану продукцію ІФН -?/? і ІФН -? лейкоцитами in vitro з дотриманням всіх відповідних умов. Підготовлені таким чином проби зберігають до аналізу при - 25 o C.
Аналіз активності ІФН у підготовлених вищеописаними методами пробах проводять за допомогою титрування досліджуваних проб в 96 - лункових мікропланшетах над монослоем клітин перевіваемих культур (L - 41, Нер - 2, A - 549, MG - 63, L- 929), інкубації 24 години при 37 o C в атмосфері 5% CO 2, подальшої інкубації в тих же умовах у присутності 100 ЦПД 50 вірусу везикулярного стоматиту (ВПС), штам Індіана. Після цього, для стандартизації й автоматизації обліку результатів аналізу мікропланшети забарвлюють 5-10 хв 0.1% розчином кристалічного фіолетового на 30% етанолі, відмивають і висушують на повітрі. Подальший облік результатів проводять або візуально, або автоматично за допомогою рідера для імуноферментного аналізу, розчиненням пофарбованого моношару клітин 2% розчином додецилсульфату натрію на 5% гліцерині (або екстракцією 30% етанолом 1:00 при 37 o C) і вимірюванням оптичної щільності отриманих розчинів при довжині хвилі 570-590 нм.
Активність ІФН в аналізованому зразку визначається за допомогою калібрувальної кривої залежності (% збережених клітин)/(активність стандартного препарату ІФН) для візуального обліку або (оптична щільність)/(активність стандартного препарату ІФН). Це дає можливість висловлювати результати аналізу в стандартних (міжнародних) одиницях (ME), а також значно підвищити точність одержуваних результатів до 0.5 ME. Облік проводиться за тією тітровочной точці, в якій збереглося 30-50% клітин від вихідного числа (при візуальному обліку) або по точці, оптична щільність якої лежить в інтервалі 0.2-0.7 од оптич. щільності (при автоматичному обліку).
Наведений комплекс показників являє собою повний варіант аналізу ІФН статусу. На практиці буває досить використовувати три основні показники: затримання загального ІФН сироватки крові (sІФН), продукція ІФН -? /? і ІФН -? лейкоцитами крові при індукції in vitro.
У нормі, вміст у крові sІФН відповідає діапазону 0-10 МО/мл, продукція ІФН -?/? 250-520 ME, ІФН -? 110-250 ME. Низький вміст ІФН у сироватці крові поєднується з високою потенційною здатністю до продукції різних типів ІФН.
При вмісті sІФН 25 МО/мл, продукції ІФН -? /? 110, ІФН -? 55 прогнозують сприятливий результат при гострому перебігу захворювання, оскільки система ІФН адекватно реагує на патологію викидом достатньої кількості ІФН. Дії природних механізмів захисту не перешкоджає етіотропна терапія (антибіотики, хіміопрепарати), з якою доцільно поєднувати препарати ІФН (віферон та ін.) Для запобігання розвитку ІФН- і імунодефіцитів та посилення ефективності лікування. Застосування індукторів ІФН малоефективно (система ІФН не в змозі відповісти на додаткову стимуляцію синтезу ІФН). Призначення препаратів ІНФ дозволить компенсувати можливий дефіцит активності систем захисту, що призведе до підвищення здатності до продукції ІФН -? /? і ІФН - ?, і, надалі, дозволить ефективно застосовувати індуктори ІФН та імуномодулятори мікробного походження.
При вмісті sІФН gt; 35, продукції ІФН -?/? 60, ІФН -? lt; 30 прогнозують важке гостре протіка...
