ярної масі близько 20 000 (верхня межа селективного діапазону першої колонки). При підключенні ще однієї колонки з розміром пір 500 Д розділова ємність в діапазоні мас до 20 000 збільшилася приблизно вдвічі, а калібрувальна залежність набору стала практично лінійної в діапазоні молекулярних мас від 5-10 2 до 2-10 6 . p> На думку Йоу з співр., колонки з жорсткими гелями краще підходять для поєднання в бімодальне набори, так як властивості цих сорбентів більш стабільні від партії до партії. Однак слід відзначити, що в останні роки якість колонок з напівжорсткими гелями і відтворюваність їх характеристик значно покращилися. Відзначено, що сучасні полімерні сорбенти більш однорідні за розмірами пор, ніж сорбенти на основі силікагелів [28]. Досвід роботи одного з авторів з колонками типу ц-сферогель показав, що з'єднання різних колонок необхідної пористості, взятих В«через однуВ» (наприклад, 5-10 2 +10 4 0 або 10 3 +10 5 0), в більшості випадків дозволяє отримати лінійну калибровочную залежність в діапазоні близько 4 порядків.
Оптимізацію розділової системи доцільно розглянути на прикладі дослідження зразка, про якого не відомо нічого, крім розчинності (у воді або в органічному розчиннику). Попереднє розділення зразка проводять на бімодальному наборі колонок з широким діапазоном поділу. Залежно від виду одержуваної хроматограми (Рис. 3) змінюють розділову систему відповідно до рекомендацій, наведеними нижче.
1. Набір оптимальний.
2. Недостатній діапазон поділу: є високомолекулярні фракції, що потрапляють в область ексклюзії. Необхідно додати колонку з більш великими порами.
3. Є фракції, що потрапляють в область ексклюзії; колонка II не бере участь у поділі. Необхідно замінити її на колонку з більш великими порами, ніж у колонки I.
В
Рис. 3. Різні види хроматограмм невідомого зразка: 1 - область поділу великопористої колонки, 2 - область поділу мелкопористой колонки
4. Колонка II не бере участі в поділі. Слід використовувати дві колонки типу I.
5. Поліпшення поділу можна отримати на двох колонках з середнім розміром пір.
6. Недостатня селективність поділу; колонка I не бере участі в поділі.
Слід використовувати дві колонки типу II.
Якщо в будь-якому з розглянутих варіантів необхідно підвищити ефективність розділення, то слід подвоїти число колонок, що входять в обраний набір.
Описаний процес оптимізації не враховує особливостей, пов'язаних з адсорбцією аналізованих речовин та іншими побічними явищами. Усунення адсорбції за рахунок модифікації рухомої фази розглянуто нижче.
Для запобігання специфічних труднощів, які виникають при ексклюзіонной хроматографії біололімеров, вітамінів і різних лабільних сполук, останнім часом найчастіше використовують сорбенти з прищепленої карбогідратний (типу діол) або ефірної фазою (Ој-бондагель Е)...
