уклеотидів). Це надає можливість для вбудовування інтронів РНК в задану ділянку іншого сегменту РНК (рис. 3). Частковий РНК, в який проводиться вбудовування, повинен містити нуклеотидну послідовність, ідентичну нуклеотидної послідовності 3'-кінцевого ділянки 5'-екзонів району 26S РНК і відповідно комплементарних тієї нуклеотидної послідовності в інтроні, яка відповідає за специфічність прямої реакції. Фрагмент, в який проводиться вбудовування, береться у надлишку. p align="justify"> В даний час описана тут ланцюг реакцій може бути реалізована тільки для інтронів РНК, одержуваної з попередника 26S РНК тетрахімени. Однак можна думати, що конструювання нових рібозімов може істотно розширити можливості цього підходу. p align="justify"> Стратегія клонування генів
Векторні молекули в обов'язковому порядку містять маркерні гени, які після перенесення вектора в клітини-реципієнти повідомляють їм нові властивості. Це може бути стійкість до антибіотика, якій до трансформації клітини не володіли, або утворення ферменту, синтез якого в клітинах-реципієнтах не відбувається. Завдяки таким знову придбаним ознаками клітини з векторними ДНК можуть бути легко знайдені в популяції вихідних клітин. Одночасно можуть бути відібрані ті клітини, які містять вектори з вбудованими в них чужорідними ДНК (рекомбінантні ДНК). Для цього вбудовування чужорідної ДНК у вектор проводиться таким чином, щоб один з маркерних ознак вектора порушувався. Так, наприклад, якщо бактеріальний вектор несе стійкість до двох антибіотиків, то чужорідну ДНК вбудовують в один з генів антибіотичною стійкості. І тоді бактерії з рекомбінантної ДНК, на відміну від бактерій з вихідним вектором, можуть рости в присутності тільки одного з антибіотиків. p align="justify"> Інший дуже поширений приклад пов'язаний з наявністю в векторної ДНК поряд з генами, що повідомляють клітці стійкість до антибіотиків, фрагмента лактозного оперона, що забезпечує утворення в клітинах-реципієнтах активного ферменту b -галактозидази. Колонії клітин з такою ознакою легко виявляються при вирощуванні їх на твердому агарі, що містить в якості субстрату b -галактозидази 5-бром-4 -хлор-3-індоліл- b -галактозид (X-gal), оскільки його розщеплення призводить до утворення бромхлоріндола - барвника, пофарбованого в блакитний колір. Якщо ж в ген b -галактозидази цього вектора вбудована чужорідна ДНК таким чином, що цей ген виявився порушеним, то трансформовані їм клітини будуть утворювати безбарвні колонії. Саме ж присутність рекомбінантного вектора в клітинах може бути зафіксовано за їх стійкості до антибіотика.
На наступному етапі серед популяції клітин з рекомбінантними векторами необхідно відібрати індивідуальн...
