обної популяції в природі
Для кількісної оцінки мікробних спільнот в природі необхідні спеціальні методи, відмінні від використовуваних при вивченні лабораторних культур. Прямий підрахунок клітин під мікроскопом на перший погляд може здаватися досить підходящим методом, але насправді він застосовний тільки для аналізу проб води. Однак навіть у такому середовищі більшість бактерій прикріплено до частинок детриту і ледь помітна при безпосередній мікроскопії. Щоб візуалізувати бактеріальні клітини в пробах води, їх фарбують флуоресцентними барвниками, такими як акридиновим помаранчевий або 4 ', 6-діамідинів-2-феніліндол (ДАФИ). Ці барвники проникають через плазматичну мембрану і зв'язуються або з клітинними білками (акридиновим помаранчевий), або з двухцепочечной ДНК (ДАФИ), забезпечуючи специфічне забарвлення бактеріальних клітин. Однак всупереч більш раннім відомостями ці барвники не дозволяють розрізняти живі і мертві клітини і серед підрахованих з їх допомогою клітин може бути значна частка мертвих. Є можливість специфічно виявляти активно дихаючі бактерії, використовуючи нові барвники, які утворюють флуоресцентні похідні тільки після відновлення дихальними ферментами (наприклад, 5-ціано - 2,3 - дітоліл-тетразолійхлорід). Прямий підрахунок із застосуванням флуоресцентних барвників не придатний, однак, як метод для дослідження зразків опадів або грунтів, оскільки в цих середовищах занадто великий фон природно флуоресціюючих сполук. p> Інші методи, що дозволяють виявляти метаболічно активні клітини, засновані на застосуванні радіоактивних міток і радіоавтографії. Для визначення синтезу білка і росту клітин використовують 14С-лейцин, синтезу ДНК і розмноження клітин - 3Н-тимідину. Обидва ці маркера використовувалися в минулому головним чином для вивчення проб води та опадів, але одержувані таким способом дані не можна вважати точними, оскільки внесений мічений попередник частково розкладається мікробами і доступна в результаті інформацію не порівнянна із зусиллями, витраченими на експерименти. p> Оцінка чисельності клітин в бактеріальних популяціях чашковим методом Коха, тобто шляхом висіву на щільні середовища в чашках Петрі і культивування, навіть при використанні складних і відносно неспецифічних середовищ дає вельми розчаровують результати. Загальне число колоній, наприклад на казеїно-крахмало-пептонном агарі, вживаному в якості стандартного середовища для обліку прісноводних бактерій, зазвичай на 1-2 порядки нижче, ніж кількість клітин, яке визначається шляхом прямого микроскопирования. Це означає, що лише 1 - 10% клітин мікробного співтовариства можуть давати колонії при використанні даної методики, і інші середовища в цьому відношенні аж ніяк не краще. p> Інший метод кількісного обліку клітин за допомогою культивування - це метод найбільш імовірного числа. Для визначення числа мікробів цим способом готують послідовні розведення (1:10) досліджуваного матеріалу в пробірках з рідким живильним середовищем...
