не менш ніж у трьох повторно і інкубують пробірки протягом часу, необхідного для прояву зростання (помутніння середовища). Припускаючи, що в останній пробірці, де після достатнього періоду інкубації спостерігається зростання, перебувала початково одна-єдина клітина, підраховують вихідне число бактерій в зразку. Перевага даного методу полягає в тому, що в рідкому середовищі в відсутність контакту з повітрям можуть рости навіть досить чутливі до О2 бактерії, а також у тому, що безпосередньо в пробірках з разведениями можна визначати, наприклад, продукти метаболізму. Недоліком такого підрахунку клітин є значна статистична невизначеність, пов'язана з оцінкою результатів за принципом В«такВ» чи В«ніВ» у трьох незалежних повторностях розведень. p> Культивування дозволяє отримати більш достовірні відомості, якщо воно застосовується для кількісного визначення конкретних метаболічних груп бактерій. Так, метаногенів бактерії, що ростуть з використанням водню/формиата, можна безпосередньо підраховувати у вигляді колоній в чашках Петрі завдяки природній флуоресценції, виявляючи таким чином 20-50% клітин їх популяції. Сульфатредуцирующие бактерії також досить успішно підраховуються шляхом культивування із застосуванням адекватних середовищ. p> Всі ці підрахунки - шляхом прямої мікроскопії або за допомогою культивування - мають в основі припущення, що мікробні клітини розподілені як окремі одиниці і в цьому вигляді помітні оптично або за ознакою зростання. Проте в природних середовищ існування мікроби часто утворюють більш-менш великі агрегати або прикріплюються до поверхонь, у тому числі до частинок рослинного або тваринного детриту, опадів або грунту, тому для їх кількісного обліку з використанням будь-якого із вищезазначених методів необхідно попередньо відокремити клітини від субстратів (поверхонь ), не порушуючи життєздатності. Можливі способи такого вiддiлення - це струшування, гомогенізація або м'яка обробка проб ультразвуком в присутності пірофосфату, хелатирующих агентів або детергентів. Слід, однак, враховувати, що ці процедури викличуть загибель деяких бактерій і придатні лише в якості компромісного решения. p> Зовсім інший підхід до аналізу природних популяцій полягає в тому, що в якості показників біомаси використовуються клітинні компоненти (хімічні маркери). Загальну живу біомасу (насправді майже в будь-якій екосистемі вона представлена ​​головним чином мікробної біомасою) можна кількісно оцінити, наприклад в грунтовому зразку, шляхом визначення загального вмісту АТР. Показником біомаси може служити також загальна кількість ДНК за умови, що процедура екстракції дозволяє відокремити ДНК з живих клітин від ДНК мертвих клітин, прикріплених до грунтових часткам. У грунтовій мікробіології досить широко застосовується метод фумігації, який полягає в тому, що зразок піддають обробці парами хлороформу при якій велика частина мікробів гине. Потім протягом 10 діб вимірюють кількість СО2, що утворюється в результаті окислення відм...
