ий, глюкоза, фосфат калію, ацетат натрію, діамммоній цитрат, сірчанокислий магній і сірчанокислий марганець, твін 80, сорбінова кислота. Готували середу згідно інструкції, зазначеної на упаковці. Стерильне середовище розливали у стерильні чашки Петрі по 15-20 мл і підсушували.
Методи дослідження.
Молочнокислий напій В«Йогурт 2,5%В» з додаванням вітаміну В готували наступним чином: у нормалізоване, пастеризоване і гомогенізоване молоко вносили концентрації 1,0 і 0,5% вітамінів В 2 , У 6 і В 12 по відношенню до кількістю сквашуватися молока, перемішували і заквашували закваскою, складається з чистої культури L . bulgaricus , в кількості 5% від обсягу отриманої суміші. У контрольний зразок вітамінів не додавали. Сквашивание проводили протягом 6 годин при температурі 41 В± 2 Лљ С. Кожні дві години проводили органолептичну оцінку, вимірювали pH і визначали загальну кількість молочнокислих мікроорганізмів в досліджуваних зразках.
Визначення органолептичних показників.
При оцінці органолептичних показників визначали колір, запах, смак і консистенцію напою. Колір напою визначали в скляній колбі при відбиває денному світлі. Запах визначали при переливанні з однієї судини в іншій. Органолептичні дослідження зразків порівнювали з нормами встановленими ТУ 9222-217-00419785-00.
Визначення активної кислотності.
Визначення активної кислотності досліджуваних зразків проводили згідно ГОСТ 26781-85 за допомогою ручного pH- метра, марка якого pH ер 2. pH-метр занурювали в досліджуваний зразок і зчитували стале значення активної кислотності. Для цього кожен аналіз проводили 3 рази. p> Визначення титруемой кислотності.
Титровану кислотність молока визначали методом титрування молока в присутність індикатора фенолфталеїну. Брали 10 мл досліджуваного напою, додавали 20 мл дистильованої води, 3 краплі фенолфталеїну і титровали 0,1 розчином NaOH. p> Кількість лугу, який пішов на титрування, множили на 10 і отримували кислотність в градусах Тернера.
Визначення загальної кількості молочнокислих мікроорганізмів.
Суть методу полягає в посіві певної кількості досліджуваного субстрату або його розведення в чашки Петрі з щільним ПС і після термостатування (залежно від видів організмів) підраховують виросли колонії. Виходячи, з запропонованої обсіменіння досліджуваного продукту готують розведення для посівів. Якщо мікрофлора досліджуваного матеріалу рясна, то розраховують таке розведення, в результаті посіву якого 1 мл цього розведення на чашки Петрі знаходилося десятки колоній. Розведення готували в пробірках на фізіологічному розчині. Стерильною піпеткою 1 мл досліджуваного зразка вносили в першу пробірку з 9 мл. фізіологічного розчину. Отримуємо розведення 1:10. Нової стерильною піпеткою перемішували розведення 1:10 і 1 мл, його переносили в другу пробірку з 9 мл. фізіологічного розчину. Виходить розведення 1: 100 і т.д. Робили 8 розведень. З останніх трьох розведень робили посів на чашки Петрі з щільною середовищем по 1 мл.
Після закінчення посівів, підписані чашки Петрі поміщали в термостат при температурі 42 В± 2 Лљ С. Через 72 години підраховували виросли колонії мікроорганізмів. p> Для підтвердження наявності зростання болгарської палички з вирослих колоній робили мазки, які фарбували простим способом (Метиленової синню). Для цього на фіксований мазок піпеткою наливали кілька крапель фарби. Через 2-3 - хвилини фарбу змивали водою, мазок висушували і розглядали під олійною імерсійною системою мікроскопа. У полі зору мікроскопа спостерігали форми бактерій, характерні для болгарської палички, одинарні палички (мал. 5).
В
Рисунок 5 - Схема проведення посіву на чашки Петрі
Для підрахунку беруть ті чашки Петрі, на яких колонії добре відділені одна від іншої. Кожну відрахував колонію позначають крапкою з нижньої сторони чашки Петрі. При великій кількості колоній дно чашки ділять на сектори, підраховують кількість колоній в кожному секторі і результати підсумовують. Слід, мати на увазі, що точність методу залежить від числа підрахованих колоній: кращим розведенням вважають те, при висіві з якого на щільною живильному середовищі виростає від 50 до 150 колоній. Якщо число вирослих колоній менше 10, то ці результати відкидають. Бажано, щоб загальна кількість підрахованих колоній при висіві даного розведення було не менше 300. p> Знаючи кількість вирослих колоній і ступінь розбавлення, легко визначити кількість мікроорганізмів в 1 мл досліджуваного матеріалу, користуючись формулою:
N = (a В± 2) K/V
Де, N - Кількість мікроорганізмів в 1 мл суспензії;
K - розведення, з якого проведено посів;
A - середнє кількість колоній на чашці Петрі при розведенні K; p> V - об'єм суспензії.
Визначення антагоністичної активності мікроорганізмів
