Головна перевага авторадіографії - простота і доступність. Витримайте (проекспоніруйте) зразок з рентгенівською плівкою, потім проявіть плівку в стандартних умовах - і отримаєте картину розподілу радіонукліда по поверхні зразка: гелю, тонкошарової хроматограми і т.д. Якщо отримана «картинка» вас не влаштовує - можна повторити експозицію з новою плівкою, збільшуючи (або зменшуючи) час за своїм бажанням. Зазвичай час експозиції змінюють у 2? 3 рази, так як зміна часу експозиції на 20? 30% істотних змін в картину не вносить. Весь сиквенс ДНК і РНК з радіоактивним фосфором використовував виключно авторадіографію. Флюоресцентна мітка практично повністю витіснила радіоактивні ізотопи з секвенування, однак авторадіографія залишається широко застосовуваним методом детекції.
Головний недолік авторадіографії - труднощі з кількісною оцінкою. При візуальному визначенні навіть інтуїтивно ясно, що інтенсивність «почорніння» плівки пропорційна кількості радіоактивних атомів в цьому місці. Але питання про цю «пропорційності» потребує поясненні. Існує кілька типів сканерів, що дозволяють досить точно визначати інтенсивність «зачернения» плівки і, отже, порівнювати плями інструментально, а не «на око». Виявилося, що діапазон активності препарату, в якому інтенсивність «зачернения» плівки прямо пропорційна кількості радіоактивних атомів, дуже невеликий і залежить від часу експозиції зразка з плівкою, типу плівки, природи радіонукліда (тип розпаду та енергія випромінювання) і навіть від режиму обробки плівки. Наприклад, для фосфору - 32 за ніч експозиції лінійна залежність «зачернения» плівки від активності зразка знаходиться в діапазоні 0,5? 25 Бк на мм2 (приблизно 30? 1500 імп / хв). Подальше збільшення активності зразка, наприклад, до 100 Бк на мм2 не приводить до більшої інтенсивності «зачернения»- Все вже «зашкалило».
Тому, проста порада для початківців працювати з кількісної авторадіографією. Зробіть кілька калібровок - нанесіть ряд плям діаметром 1? 1,5 мм з активністю 1 · 3 · 10 · 30 · 100 · 300 Бк, проекспоніруйте їх з рентгенівською плівкою різний час і після обробки плівки проскануйте її на своєму приладі. Ви відразу визначте діапазон, в якому ваші подальші кількісні виміри радиоавтографов будуть коректними. Для різних радіонуклідів такий діапазон розрізняється дуже істотно, але враховувати його треба в будь-якому випадку.
Для збільшення чутливості авторадіографії (точніше, для зменшення часу експозиції) можна скористатися підсилюють екранами. Це вельми ефективно для фосфору - 32 або йоду - 125, однак практично марно для м'яких (слабоенергетіческіх)? - Випромінювачів. Використання екрану для фосфору - 32 дозволяє знизити час експозиції в 2? 3 рази, але за це доводиться «платити» погіршенням дозволу, яке відбувається за рахунок «розмивання зон».
3. Сцинтиляційні лічильники
Ефект сцинтиляції для кількісного визначення радіонуклідів починали використовувати ще в часи Резерфорда, який візуально вважав сцинтиляційні спалаху під мікроскопом. За сто років принципових змін не відбулося. Поруч з джерелом випромінювання поміщають сцинтилятор і ФЕУ (фотоелектронний помножувач), який вважає спалаху. Сцинтілятор може бути твердим, а може бути і рідким (частіше, розчиненим в рідині). У флакон (vial) з рідким сцинтилятором додають тестований зразок, і в цьому випадку можна ефектив...
