/i>
S - площа квадрата сітки в мм 2 ; 1000 мм 3 =1 мл.
2.7 Визначення показника гідрофобності
Показник гідрофобності (ПГ) демонструє співвідношення гідрофільних і гідрофобних компонентів клітин в поверхневих шарах їх оболонки і є важливою фізико-хімічною характеристикою. При вимірюванні ПГ в якості вуглеводневої фази використовують хлороформ [Оцінка гідрофобних властивостей ..., 2002]. Визначення ПГ проводилися за наступною схемою:
· Розбавити в 10 разів 1 мл суспензії клітин, після чого виміряти оптичну густину (ОГ). Виміри проводилися на колориметрі фотоелектричному концентраційному КФК - 2МП.
· Розрахувати кількість буфера і суспензії для отримання ОП=0,25 (довжина оптичного шляху 3,0 мм,?=670 нм) із загальним обсягом 4,5 мл.
Кількість суспензії (а): а=4,5м - (ОП=0,25)
Кількість буфера (в); в=4,5 - а.
· Приготувати суспензію згідно знайденим обсягами і виміряти ОП1 (вихідну).
· Внести 1 мл хлороформу в усі пробірки і поставити на гойдалку на 15 хв. (150 об/хв) в горизонтальному положення.
· Відстоювати в вертикальному положення годину, після цього виміряти ОП2 (кінцева).
· Знайти ПГ за формулою:
ПГ=100 - ОП після /ОП до ? 100% (2)
2.8 Визначення емульгує активності
емульгирующогося активність (ЕА) визначали струшуванням в хімічній пробірці 4 мл бактеріальної суспензії з 3 мл дизельного палива на орбітальній гойдалці при 200 об/хв з подальшим відстоюванням у вертикальному положенні протягом 1:00 для розділення водної та вуглеводневої фаз. Наявність або відсутність емульсії на межі розділу фаз визначається візуально: + - Емульсія є, - - Емульсія відсутня. Так само емульгуючу активність - розраховують кількісно за формулою:
ЕА=(Н е /Н ? ) ? 100, де (3)
ЕА - емульгуюча активність (%),
Н е - висота стовпчика емульсії (мм),
H ? - висота всього стовпчика рідини в пробірці (мм) [Willumsen, Karlson, 1997].
3. Вплив фізико-хімічних факторів на ріст нефтеокисляющих актинобактерий
Для більш ефективного вирощування мікроорганізмів в лабораторних або промислових умовах необхідно визначити ступінь впливу фізичних і хімічних факторів і оптимізувати склад живильного середовища.
3.1 Застосовність методу вимірювання оптичної щільності, як показника концентрації клітин для досліджуваного штаму
За параметр, побічно говорить про кількість клітин та інтенсивності росту мікроорганізмів, була обрана оптична щільність рідкої культури, яка вимірювалася на фотоелектроколориметр. Складнощі з відпрацюванням методики пов'язані з особливістю клітин даного штаму збиратися в клітинні агрегати, що веде за собою зниження оптичної щільності при незмінному значенні концентрації клітин. Так само у зв'язку з вищеописаною причиною практично всі вимірювання оптичної щільності культур будуть порівнюватися з іншим методом оцінки кількості клітин в одиниці об'єму рідини.
Для визначення прямій залежності концентрації бактерій від оптичної щільності культури було проведено порівняння показань оптичної щільності культури і кількісного обліку мікроорганізмів за допомогою лічильної камери Гаряева. З отриманих даних можна говорити про достовірність використовуваного методу і по калібрувальним кривим можливо визначити кількість клітин по каламутності культури.
Для побудови графіків були обрані показання оптичної щільності і кількість клітин, врахованих за допомогою лічильної камери Гаряева.
Рисунок 1 - Графік залежності оптичної щільності від кількості клітин бактерій на легкій воді
При порівнянні даних залежності кількості клітин від оптичної щільності на легкій воді (ЛВ) показано, що в рідкій культурі з ОП 0,2 - 1 ум. од. при довжині хвилі 670 нм концентрація клітин знах...
