одиться в межах 5 € 10 6 - 2,5 € 10 7 на 1 мл середовища. Отже, для подальших експериментів оптичну щільність бактеріальної суспензії можна використовувати як експрес показник оцінки вмісту клітин на основі єдиного калібрувального графіка для зразків у звичайній і легкій воді на сахарозе.
.3 Температурна залежність росту Rhodococcus erythropolis B2 від ізотопного складу води
Метою експерименту було визначення наявності впливу легкої води на швидкість росту і активність бактерій Rhodococcus erythropolis В2. Даний етап дослідження полягав у визначення приросту біомаси бактерій в часі, для чого необхідно побудувати криві зростання для даного штаму.
Досвід проводився в різних температурних умовах в трьох паралелях при температурі рівній t 1=30-33 ° С і t 2=20-23 ° С, де середу на основі легкої води є досвідом, а на основі звичайної води - контролем.
У процесі культивування відбиралися проби 3 рази на добу з 2 зразків, протягом 4 діб зростання. На підставі даних оптичної щільності були побудовані криві зростання.
Малюнок 2 - Крива росту для досліджуваного штаму при t 1=30-33 ° С
Малюнок 3? Крива зростання для досліджуваного штаму при t 2=20-23 ° С
Порівнюючи результати дослідів протекавших при різних температурах, можна відзначити відмінність росту культури при 20-23 ° С. Як видно з малюнка 2, ріст мікроорганізмів при 30-33 ° С практично не відрізнявся на всіх стадіях кривої у випадку звичайної та легкої води. На 4 добу ОП культур обох варіантів становило близько 0,7, що відповідає 1,5 € 10 7 кл/мл.
У разі зниження температури культивування до 20-23 ° С, спостерігалися відмінності в інтенсивності росту протягом усього періоду культивування. У середовищі на звичайній воді зберігалася динаміка, аналогічна спостережуваної при 30-33 ° С - повільне зростання, максимумом оптичної щільності склав близько 0,2 ум. од. У разі середовища на легкій воді з першого доби інтенсивність росту превалювала над контролем і до четвертого добі культивування перевищувала середу на звичайній воді більш ніж в 5 разів, що відповідало 2,5 € 10 7 кл/мл. Можна припустити, що кращий ріст родокока на легкій воді пов'язаний з наявністю стресовій ситуації, у вигляді пониження температури. Для більш детального вивчення впливу легкої води на Rhodococcus erythropolis В2, розглянуті такі параметри як: показник гідрофобності і емульгуючу активність.
Показник гідрофобності (ПГ) - служить для процентного визначення співвідношення гідрофільних і гідрофобних компонентів в клітинній стінці бактерій. Так як Rhodococcus erythropolis В2 вирощувався на мінеральному середовищі з сахарозою, яка є гідрофільним вуглецевим субстратом, гідрофобність клітин родокока була мінімальна - близько 10% [нафтоокислюючих штам Rhodococcus erythropolis як ..., 2012].
На малюнку 4 представлені величини ПГ клітин у процесі росту. Як видно з наведених даних відсутня помітна різниця між гідрофобністю бактерій, які виросли на легкій і звичайній воді. У процесі культивування гидрофобность клітин знижується.
Малюнок 4 - Показник гідрофобності клітин для культури В2
Емульгуюча активність (ЕА) - це показник, завдяки яким можна визначити з якою активністю мікроорганізми можуть емульгувати нафту і її похідні.
Малюнок 5 - емульгирующогося активність клітин для культури В2
На малюнку 5 наведені значення ЕА клітин у процесі росту. Як видно з представлених даних, у бактерій, які виросли на легкій і звичайній воді, ЕА варіює в межах 40% - 50%. Наявність ЕА пов'язано з продукуванням штамом бактерій Rhodococcus erythropolis B2 біосурфактантов, необхідних для диспергування і полегшення биоразложения нафтопродуктів [Волченко, Карасьова, 2006].
3.3 Вплив ізотопного складу води на накопичення біомаси Rhodococcus erythropolis B2
Для досвіду використовувалося 30 конічних колб з мінеральною середовищем на основі легкої води. Приготовлені середовища інокулював 0,5 мл суспензії клітин Rhodococcus erythropolis В2 змитих з мясопептонного агару (МПА) до стартовою ОП=0,05-0,07 ум. од. Культивування проводилося протягом 7 діб, на орбітальній гойдалці при 100 об/хв. Після закінчення культивування відбиралося по 10 мл суспензії клітин під зважені пробірки (на гравіметрію). Дослід проводився в 2 етапи по 3 повторності.
Для оцінки впливу ізотопного складу води на накопичення біома...
