/P>
) После інкубації з агробактерій течение 2 діб або при появі видимих ???? бактеріальніх колоній переносячи інокулят шматочкі листа на следующие середовища: 6 чашок S + Cx + Km; 6 чашок MS + CX.
) Інкубують чашки при нізькій освітленості (2000-4000 люкс) i температурі 24-26 ° С, періодічно спостерігаючі за РОЗВИТКУ пагонів и калуса.
Наступний етап процедури трансформації - зрізання пагонів, что розвинулася в різніх условиях ОБРОБКИ, та перенесених їх на селективні середовище для укорінення и Виявлення трансформованості пагонів. Если експеримент з трансформації даного сорту проводитися Вперше, то дере, чем переносіті Пагоні, Важлива сделать деякі спостереження, что допомагають спланувати подальші експеримент помощью методом листового дисків.
визначаються ділянки Утворення калуса и регенерації пагонів. Визначаються Кількість и розмір пагонів, что одержуються при Кожній обробці, и оцінюють:
нормально здатність листових дисків формуваті калуса и регенеруваті Пагоні;
Вплив антібіотіка, переважної розвиток A. tumefaciens (в даного випадка, цефотаксиму) на освіту калуса и регенерацію пагонів.
Підбірають концентрації селективного антібіотіка (канаміціна) Нетрансформовані Пагоні іноді віжівають в процессе селекції - це явіще часто розглядають як пробою raquo ;. Однако коріння, як правило, більшою мірою чутліві до антібіотіків, І, отже, здатність пагонів вкорінюватіся на селектівної середовіщі, что містіть більш Високі концентрації селективного агента представляет собою вагомий доказ їх трансформованої природи.
Зрізають й достатньо Великі Пагоні, щоб з ними Було легко маніпулюваті ( gt; 0,5 см), и Повністю відаляють калуса.
Підрізають нижню часть Пагоня, поки НЕ залиша верхівкова брунька и дві чі три листа з пазушними Бруньков.
Поміщають зрізані Пагоні в агар Із СЕРЕДОВИЩА MS + Cx и MS + Cx + Km, та інкубують при 24-28 ° С і середньої освітленості (4000 люкс). Контрольний досвід на середовіщі, что НЕ містіть селективного агента, необхідній, щоб упевнити в тому, что вкорінення відбувається нормально.
У следующие 5-20 днів періодічно спостерігають за експлантаті пагонів, стежачі за з'явиться ознакой Утворення коренів, хлорозу та формирование НОВИХ листків. У більшості віпадків только трансформовані Пагоні успішно вкорінюються на середовіщі, что містіть канаміцін [10].
. 2 Підтримання и розмноження трансформованості пагонів
Для розмноження культівованіх пагонів багатьох відів рослин відомі два основних способи. Пагоні можна вісадіті в компост, вірощуваті їх фотоавтотрофної и розмножуваті путем Отримання насіння. Це, зрозуміло, необходимо для Вивчення нормальної експресії та Успадкування перенесеного гена. Однако может віявітіся, что после трівалої важкої роботи регенеруваті Всього кілька трансформованості пагонів. У ціх випадка доцільніше розмножіті цею Надзвичайно цінній материал вегетативно. Така необходимость вінікає того, что много гетеротрофних пагонів НЕ пріжіваються у грунті як фотоавтотрофні рослини (культівовані Пагоні НЕ здатні до інтенсівного фотосинтезу, а залежався від пожівніх Речовини, что містяться в ростовому середовіщі). До тихий пір поки рослини НЕ сформують воскову кутикулу, много з них будут в януті и Ніколи НЕ відновляться. Крім того, в ціх условиях рослини очень спрійнятліві до Ураження грибами. Можливо і атака шкідніків або хвороботворніх мікроорганізмів дере, чем зав яжуться насіння, так что розумно зберігаті Лінії рослин в культурі. Для прикладу описано розмноження пагонів Тютюна [11].
2.3 Розмноження пагонів Тютюна помощью Брунькова пазух
Відаляють укоріненні Пагоні з середовища и поміщають на стерильну білу кахельну плитку.
Розрізають стебло на кілька частин, шкірні з якіх містіть пазушні бруньки. Відаляють листя, залиша только Короткі (2-3 мм) відрізкі черешків.
Поміщають відрізок морфологічно ніжнім кінцем в пожівне середовище MS + Сх. Інкубують при низьких освітленні (2000-4000 люкс) i температурі 24-26 ° С, періодічно спостерігаючі за РОЗВИТКУ пагонів з пазушних бруньок.
Розвінуті пазушні Пагоні зрізають. Смороду могут буті вікорістані для розмноження, як описано вищє.
При отріманні достатньої кількості пагонів їх укорінюють и переносячи в грунт, вірощуючі в теплиці [12].
Висновок
Початкова розробка методів трансгенозу у рослин обгрунтовувалася необхідністю конструкції НОВИХ геномів, что забезпечують більш скроню Продуктивність, якість продукції и стійкість до несприятливого вплівів. Ві...
