кислими СЕРЕДОВИЩА), вівільнення кофеїну чистимо хлорофором і визначення его масової Частки спектрофотометричного методом.
Спектрофотометрія - аналіз на Основі вимірювання поглінання монохроматичного випромінювання ультрафіолетової, відімої та інфрачервоної ділянки спектра. Такі вимірювання проводять помощью спектрофотометрів.
Проведення методу
. 5 г натуральної розчінної кави, якові зважено з похібкою ± 0,001 г, кладуть у хімічний стакан місткістю 100 см3, додаються 5 см3 Розчин аміаку и поміщають у кіплячу водяну баню на 2 хв. После охолодження кількісно переносячи в мірну колбу місткістю 100 см 3 і З дістільованою водою доводящего об'єм до Позначки, ретельно перемішують и залішають до полного охолодження. Помощью піпеткі відбірають 2 см 3 Розчин, Який здобули, поміщають у хімічний стакан місткістю 100 см 3, додаються 3 г діатомової землі и ретельно перемішують.
Ретельно перемішують 3 г діатомової землі з 2 см 3 Розчин їдкого натру до одержании однорідної суміші. (Матеріал для заповнювання колонки можна підготуваті Ранее и зберігаті в Закритого посудинах. Для кожної лугової колонки нужно 5.16 г суміші). Одержаний Волога порошок переносячи частинами, примерно по 2 г, у хроматографічну колонку діаметром 21 мм, нижнє частина якої Заповнена набиванням з бавовняної вати або скловаті. Без особливого зусилля ущільнюють суміш после шкірного Доданий матеріалу, застосовуючі для цього Склянов Палички, до Утворення однорідного и щільного кулі.
Щоб унеможлівіті Втрати кофеїну, хімічний стакан двічі очіщають порціямі діатомової землі по 1 г и такоже поміщають у луговий колонку. Зверху кладуть куля бавовняної вати або скловаті.
Ретельно перемішують 3 г діатомової землі з 3 см 3 Розчин сірчаної кислоти до одержании однорідної суміші. (Матеріал для заповнювання колонки можна підготуваті Ранее и зберігаті в Закритого посудинах). Для кожної кіслотної колонки нужно 6,36 г суміші). Одержаний Волога порошок переносячи частинами, примерно по 3 г, у хроматографічну колонку діаметром 17 мм, нижнє частина якої Заповнена набиванням зі скловаті. Без особливого зусилля ущільнюють суміш после шкірного Доданий матеріалу, застосовуючі для цього Склянов Палички, до Утворення однорідного и щільного кулі. Зверху кладуть куля скловаті.
Встановлюваті колонки одну над другою нужно так, щоб рідина з лугової колонки прямо стікала в кислотних колонку. Пропускають поступово 150 см 3 діетилового ефіру крізь обідві колонки.
Кран колонки 2 регулюють так, щоб на поверхні вмісту колонки остался тонкий куля Рідини. После цього колонку 1 забірають, а крізь колонку 2 (додаток Б) пропускають ще 50 см 3 діетилового ефіру. Рідіну, что вітікає з колонки 2, злівають у відходи. (Діетилового ефір, Який Використовують, можна відновіті збовтуванням его з сірчанокіслім залізом).
Надмірну Кількість діетилового ефіру віводять помощью вакуумного насоса або гумової груші до тихий пір, поки НЕ Припін стікання крапель діетилового спирту Із колонки, и Повітря, Пожалуйста виходим з крану, що не буде нести Слабкий запах діетилового ефіру.
Щоб Вилучити Кофеїн, крізь колонку 2 пропускають 45-50 см 3 хлороформу, Який збірають у мірну колбу місткістю 50 см 3 з одною Позначку, и доводящего об'єм до Позначки хлороформом. Одержании суміш ретельно перемішують.
Крані колонок регулюють так, щоб ШВИДКІСТЬ Рідини (хлороформу и діетилового ефіру) НЕ перевіщувала 3 см 3/хв. и забезпечувала рівномірне проходження Рідини крізь увесь вміст колонок.
Щоб избежать вдихання парів Розчин діетилового ефіру та хлороформу и возможности Вибух, їх додаються у добро вентільованій вітяжній шафі.
На спектрофотометрі вімірюють спектральних поглінальну здатність (СПЗ), розчинна, Який здобули у кварцовий кюветі відносно чистого, насіченого водою хлороформу за Довжина Хвилі максимального поглінання 276 нм и за Довжина ХВИЛЮ на 30 нм вищої и ніжчої цього значення- для підтвердження чистоти одержании кофеїну.
Если максимальна СПЗ перевіщує межу вимірювання вікорістовуваного приладнати, треба повторити вимірювання на розведения розчіні кофеїну хлороформі. Здійснені розведення треба враховуваті во время розрахування вмісту кофеїну. Если максимально вимірювання СПЗ менше чем 0,2, то треба повторити аналізування, вікорістовуючі більшу наважку досліджуваного бланках натуральної розчінної кави.
Приготування и спектрометрічне вимірювання Контрольний розчин 0,1 г чистого кофеїну, Який зважено з похібкою ± 0,001 г, кладуть у мірну колбу з одною Позначку місткістю 1 000 см3, розчіняють у хлороформі и доводять до Позначки. Помощью піпеткі відбірають 5,0 см 3 одержании Розчин, Який поміщають у мірну колбу з ...
