еред виявленням і оцінкою змісту мікотоксину, використовуючи ряд класичних аналітичних методів, таких як ВЕРХ, газова хроматографія, мас-спектрометрія, флуорометрія, ВЕТСХ і ТШХ. Метод полягає у введенні екстракту зразка в колонку, що містить іммуноафінную матрицю, що містить тверду фазу (наприклад, гранули агарози), до якої ковалентно приєднані антитіла проти мікотоксину (малюнок 1.3.1). Молекула токсину, що міститься у зразку, приєднується до відповідного иммобилизировать антитілу. p> Наступні кроки включають видалення незв'язаних матричних компонентів і екстрагента, елюція токсину, змінюючи елююють склад і, нарешті, виявлення токсину, використовуючи аналітичні методи. Як альтернатива, мікотоксин, пов'язаний у колонці, може бути елюіровать і безпосередньо виміряно флюорометріей, заснованої на власній флюоресценції мікотоксинів. p> Мембранний тест дозволяє за короткий період часу (близько 10-15 хв) дати відповідь на питання: чи присутні у випробуваному зразку мікотоксини вище рівня межі чутливості даного тесту? Тобто фактично це якісне визначення наявності/відсутності мікотоксинів у пробі. Метод вимагає екстракції, фільтрації, очищення (через колонку) і розведення зразка. Далі розчин наноситься на мембрану сенсибилизированную моноклональними антитілами, куди також додається ферментний кон'югат мікотоксину. Якщо концентрація мікотоксинів у зразку перевищує межу чутливості тесту, всі антитіла на поверхні зв'язуються з ними і весь доданий кон'югат віддаляється на етапі відмивання. При додаванні безбарвного субстрату кон'югат на поверхні мембрани каталізує кольорову реакцію, в результаті якої на місці зв'язування кон'югату утворюється кольорова пляма. Фарбування аналітичної зони мембрани говорить про відсутність мікотоксинів у зразку. p> Імуноферментний аналіз зазвичай використовується для моніторингу наявності мікотоксинів вище певного рівня (або їх відсутності) у випробуваному зразку. В даний час доступний ряд якісних, напівкількісних і кількісних методів. Грунтуючись на результатах ІФА підозрілі зразки повинні бути перевірені ще раз класичними методами. Доступні різні варіанти ІФА для аналізу мікотоксинів (наприклад, мембранні тести, мікротітровальних планшети і пробирочную методи). Як правило, метод ІФА заснований на конкурентом аналізі, який використовує або пов'язані з ферментним кон'югатом мікотоксини, або антитіла проти певного аналізованого токсину (малюнок 1.3.2). Типова послідовність реакцій, використовуючи готові реактиви у форматі мікротитрувального планшета наступні:
. ферментний кон'югат додається до екстракту випробуваного зразка;
. суміш додається до відповідних антитіл, нанесеним на поверхню лунок планшета (наприклад, мікротітровальних планшет, сенсибілізований антитілами);
. кількість поєднаного з токсином кон'югату, яке пов'язується іммобілізованими антитілами залежить від кількості токсину в зразку; чим вище кількість токсину в зразку, ...
