Зміст
Введення
. Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР)
.1 Суть методу ПЛР. ДНК-полімераза
.2 Проведення ПЛР
. Cтадіі постановки ПЛР
.1 Підготовка проби біологічного матеріалу
.2 Ампліфікація
. Застосування ПЛР в діагностиці грипу
.1 Матеріали та методи
.2 Результати
Висновок
Література
Додаток
полімеразна реакція ампліфікація праймер
Введення
Людство увійшло в третє тисячоліття з великим запасом знань в галузі наук про життя і колосальним потенціалом їх практичного використання. Сучасна людина може довільно і цілеспрямовано змінювати спадковість навколишнього його живого світу - бактерій, рослин, тварин і людини. З'явилися безпрецедентні можливості технологічного прогресу (біотехнологія та біоінженерія), який відкрив також нові шляхи в медицині (генна терапія) і сільському господарстві (трансгенні, або генетично модифіковані, рослини і тварини). Все це виникло на базі революційних проривів у фундаментальній науці (молекулярна біологія), які потім і породили біотехнологічну революцію.
Епохальним відкриттям молекулярної біології нашого століття став запропонований в 1983 р американським дослідником Керрі Б. МАЛЛІС, удостоєним за цей винахід Нобелівської премії в 1993 р, альтернативний метод аналізу геномної ДНК - метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР ). ПЛР дає можливість протягом дня з однієї молекули ДНК отримати 100 млрд. Подібних за структурі молекул і однозначно побачити потрібні ділянки, а потім перевірити генетичний матеріал, екстрагований з досліджуваного клінічного зразка, на наявність у його складі ділянки чужорідної або зміненої генетичної інформації. Ця реакція проста у виконанні: потрібні лише пробірка, кілька простих реагентів і джерело тепла. Препарат ДНК, який необхідно копіювати може бути чистим, а може являти собою складну суміш різних біологічних речовин. Як джерело ДНК підходить і людський волос, і біоптат тканини, і крапля засохлої крові, виявлена ??на місці злочину, і мозок мумії, і навіть тіло мамонта, який пролежав 40000 років у вічній мерзлоті. За роки, що минули з часу відкриття полімеразної ланцюгової реакції, вона знайшла застосування у всіх галузях біології: опубліковано більше 1000 робіт, у яких була використана ця реакція. Ідея її так проста, що, враховуючи значення ПЛР для розвитку біологічних досліджень, багатьом тепер здається неймовірним, що ніхто не додумався до неї раніше, хоча вже багато назад потрібні для проведення цієї реакції компоненти були доступні. Raquo;
Актуальність даної роботи полягає в тому, що полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) є унікальним методом діагностики, і перевага її у визначенні грипу. Мета дослідження: розкрити поняття та механізм полімеразної ланцюгової реакції. Об'єктом дослідження є дані про ПЛР, предметом є дані діагностики грипу методом ПЛР. Завдання исслдеования: систематизувати існуючу літературу з полімеразної ланцюгової реакції, дати короткий огляд проблеми лабораторної діагностики грипу, встановити роль методу ПЛР, проаналізувати існуючі дані з цієї проблеми.
1. Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР)
1.1 Суть методу ПЛР. ДНК-полімераза
Полімеразна ланцюгова реакція - експериментальний метод молекулярної біології, що дозволяє добитися значного збільшення малих концентрацій певних фрагментів нуклеїнової кислоти в біологічному матеріалі. Такий процес збільшення числа копій ДНК називається амплификацией . Копіювання ДНК при ПЛР здійснюється спеціальним ферментом - полімеразою. ДНК-полімераза (Мал. 3) - фермент, що бере участь у реплікації (ампліфікації ДНК в живих організмах) ДНК. Ферменти цього класу каталізують полімеризацію дезоксірібонуклеотідов уздовж ланцюжка нуклеотидів ДНК, яку фермент читає і використовує як шаблон. Тип нового нуклеотиду визначається за принципом комплементарності з шаблоном, з якого ведеться зчитування.
ДНК-полімераза додає вільні нуклеотиди до 3 -кінців збираної ланцюжка. Це призводить до подовження ланцюжка в напрямку 5 - 3 laquo ;. Жодна з відомих ДНК-полімераз не спроможна створити ланцюжок з нуля raquo ;: вони в змозі лише додавати нуклеотиди до вже існуючої 3 -гідроксільной групі. З цієї причини ДНК-полімераза потребує праймерів - короткою послідовності нуклеотидів (частіше 20-25), комплементарної кінцевим ділянкам досліджуваного гена - до якого вона могла б додати перше нуклеотид. Праймери складаються завжди з основ ДНК і РНК, при цьому перші дві підстави завжди РНК-підстави. Праймери синтезуються іншим ферментом - праймазой . Ще один фермент -
