Федеральне агентство з освіти
Державна освітня установа
Вищої професійної освіти
"Володимирський державний університет"
Кафедра біології
реакція зв'язування комплементу (РСК) І РЕАКЦІЯ ТРИВАЛОГО зв'язування комплементу (РДСК)
Виконав: ст. гр. Б-105
Отт О.В.
Соколова О.М.
Перевірив: Ручнова О.І.
Володимир 2009
реакція зв'язування комплементу, РСК, реакція Борде - Жангу [по імені бактеріологів Ж. Борде (J. Bordet) і О. Жангу (О. Gengou), 1901], високоспецифічних і дуже чутлива серологиче. реакція, заснована на властивості комплексу антиген - антитіло фіксувати вільний комплемент.
Комплемент (система комплементу) (від лат.complementum - доповнення), група глобулярних білків сироватки крові тварин і людини, що представляють собою частину імунної системи організму. При попаданні в організм інфікуючих його бактерій або вірусів, деяких токсинів або виникненні власних трансформованих клітин відбувається активація комплементу, в результаті чого клітини-мішені лизируются (руйнуються), а токсини і віруси нейтралізуються. Тому систему комплементов розглядають поряд з макрофагами як передовий рубіж імунного захисту організму. p align="justify"> Цю реакцію широко застосовують при ідентифікації антигенів і в серодіагностики інфекцій, особливо захворювань, викликаних спірохетами (реакція Вассермана), рикетсіями і вірусами.
РСК - складна серологічна реакція. У ній беруть участь комплемент і дві системи антиген - антитіло. По суті, це дві серологічні реакції. p align="justify"> Перша система - основна складається з антигену і антитіла (один відомий, іншої немає). До неї додають певну кількість комплементу. За відповідності антигену і антитіла цієї системи вони з'єднаються і зв'яжуть комплемент. Утворився комплекс дрібнодисперсний і не видно. br/>
зв'язування комплемент реакція серодіагностика
В
В
Про утворення цього комплексу дізнаються за допомогою другої системи гемолітичної або індикаторної. У неї входять еритроцити барана (антиген) і відповідне їм гемолітична сироватка (антитіло), тобто готовий імунний комплекс. У цій системі лізис еритроцитів може відбутися тільки в присутності комплементу. Якщо комплемент пов'язаний першою системою (при відповідності в ній антигену і антитіла), то в другій системі гемолізу не буде - бо немає вільного комплементу. Відсутність гемолізу (вміст пробірки каламутне або на дні її Осад еритроцитів) реєструють як позитивний результат РСК. p align="justify"> Якщо в першій системі антиген не відповідає антитілу, то імунний комплекс не утворюється і комплемент залишиться вільним. Що залишився вільним, комплемент бере участі в другій системі, викликаючи гемоліз, - результат РСК негативний (вміст пробірок прозоро - "лакова кров"). p align="justify"> Компоненти реакції зв'язування комплементу:
. Антиген - зазвичай лизат, екстракт, гаптен; рідше суспензія мікроорганізмів
. Антитіло - сироватка хворого
. Комплемент - сироватка морських свинок
. Антиген - еритроцити барана Гемолітична система
. Антитіло - гемолизин до еритроцитів барана
. Ізотонічний розчин
Підготовка інгредієнтів
. Сироватку розводять у 3 рази менше її титру. Готують загальне розведення сироватки для всього досвіду, обсяг якого визначають, помноживши об'єм сироватки в одній пробірці (наприклад, 0,5 мл) на число пробірок, трохи перевищує число їх в досвіді. Надлишок рідини необхідний при приготуванні всіх компонентів реакції: частина її залишається на стінках пробірок, колб, піпеток. Обсяги розведеного гемолизина і суспензії еритроцитів, доливаючи сироватку до еритроцитів, ретельно перемішують і інкубують 30 хв при 37 В° С (сенсибилизируют). p align="justify">. Еритроцити барана. Готують 3% суспензія відмитих еритроцитів барана на всю кількість пробірок в досвіді. Для приготування гемолітичної системи за 30 хв до внесення її в досвід змішують рівні об'єми еритроцитів барана з антитілом до них. p align="justify">. Комплемент зазвичай розводять 1: 10. Перед кожним досвідом його обов'язково титрують. Титр комплементу - це його найменша кількість, при додаванні якого до гемолітичної системі відбувається повний гемоліз протягом 1 год при 37 В° С.
. Антиген зазвичай отримують готовим із зазначенням його титру, тобто тієї кількості, яка після розведення антигену повинно міститися в 1 мл. Наприклад, при титрі 0,4 його ро...
