Випускна робота бакалавра
Біохімія
Ідентифікація генів ізоцітратліази в проростаючих насінні арабидопсиса
Реферат
глиоксилатного ЦИКЛ, ІЗОЦІТРАТЛІАЗА, глюконеогенез, ПЛР, зворотна транскрипція, РНК.
Метою роботи була ідентифікація генів ізоцітратліази в проростаючих насінні арабидопсиса. Було встановлено, що активність ізоцітратліази індукується в перший день проростання і поступово збільшується до максімумального значення на 4 день. Отримано препарати сумарною клітинної популяції РНК. Методом зворотної транскрипції отримана кДНК. Проведено ЗТ-ПЛР аналіз, який показав, що дві виявлені форми ферменту є ізоферментами і експресуються двома генами - icl 1 і icl 2.
Список скорочень
кДНК - комплементарна ДНК
ПЛР - полімеразна ланцюгова реакція
РНК - рибонуклеїнова кислота
DTT- дітіотрейтол
EDTA- етилендиамінтетраоцтова кіслотаінгібітор рибонуклеази плаценти людини
M-Mlv- ревертаза вірусу Moloney лейкозу мишей
Taq- ДНК-полімераза Thermus aquaticus
ІЦЛ - ізоцітартліаза
МС - малатсінтаза
ГЦ - гліоксилатний цикл
РК - жирна кислота
ПААГ - поліакріламідний гель
Зміст
Введення
Глава 1. Огляд літератури
. 1 Загальна характеристика глюконеогенезу
. 2 Глюконеогенез в рослини
. 3 Роль глиоксилатного циклу в глюконеогенез Е
1.4 Характеристика структури гена і білка ІЦЛ
Глава 2. Експериментальна частина
. 1 Цілі і завдання
. 2 Об'єкти та методи дослідження
. 2.1 Об'єкт дослідження
. 2.2 Методи дослідження
. 3 Результати та їх обговорення
. 3.1 Динаміка активності ізоцітратліази
. 3.2 Ідентифікація генів icl 1 і icl 2
Висновки
Література
Введення
Тривалий час піддається вивченню гліоксилатний цикл рослин, що забезпечує рослини интермедиатами при конверсії запасних ліпідів, а також в зеленій рослині бере участь у перетворенні токсичних продуктів фотодихання в нешкідливі речовини, використовувані в конструктивному метаболізмі. Ключовим ферментом глиоксилатного циклу є ізоцітратліаза.
Дослідження окремих ланок клітинного метаболізму є однією з найважливіших завдань сучасної біології. Воно має теоретичне і практичне значення, оскільки дозволяє наблизитися до розуміння механізмів функціонування організму.
Вивчення структурно-функціональної організації і молекулярних механізмів регуляції ключового ферменту глиоксилатного циклу - ізоцітратліази, є актуальною проблемою сучасної біохімії рослин.
Глава 1. Огляд літератури
. 1 Загальна характеристика глюконеогенезу
Біосинтез глюкози та інших вуглеводів з простіших попередників є в кількісному відношенні найважливішим процесом у біосфері. Точно також як перетворення глюкози в пировиноградную кислоту, каталізуються ферментами гліколізу, є центральним шляхом катаболізму вуглеводів в більшості клітин як в аеробних, так і в анаеробних умовах, також зворотний процес - перетворення пірувату в глюкозу - є найбільш важливим спільним шляхом біосинтезу моно- і полісахаридів. У цей центральний біосинтетичний шлях вливаються дві головні «живлять шляху»: один з них з ряду реакцій, за допомогою яких інтермедіати ЦТК, лактат, більшість амінокислот, пропіонат перетворюються на пировиноградную кислоту [рис.1] [цей процес, що протікає у всіх організмів називається глюконеогенезом ]; другий важливий шлях полягає у відновленні СО 2 до глюкози [цей шлях є відмітною особливістю автотрофов].
Глюконеогенез реалізується шляхом звернення деяких стадій гліколізу, проте в гликолитическом шляху є три незворотних стадії, які не можуть використовуватися при перетворенні пірувату в глюкозу, тому використовуються альтернативні реакції [обхідні шляхи], які термодинамічно благоприятствуют синтезу глюкози.
Перший обхідний шлях у деяких тварин вимагає спільної дії цитозольних і мітохондріальних ферментів. Реак...
