тологічному матеріалі декількох десятків життєздатних особин збудника. Достовірно підтвердити туберкульозну природу захворювання, вивчити біологічні властивості виділеного збудника і, що особливо важливо, визначити його лікарську чутливість можливо тільки при виділенні культури мікобактерій.
Дуже важливою перевагою методу культурального дослідження є можливість отримання культури збудника, яка може бути детально досліджена, ідентифікована і вивчена відносно се лікарської чутливості, вірулентності та інших біологічних властивостей.
Існують реальні можливості підвищення результативності класичних методів мікробіологічного дослідження за рахунок вдосконалення методів підготовки матеріалу, застосування нових барвників, модифікації систем культивування та реєстрації росту мікобактерій (наприклад, використання автоматизованих систем типу ВАСТЕС MGIT 960, МВ/ВАСТ і ін.) [33].
Однак необхідно відзначити, що існує ряд факторів, що обмежують широке застосування культурального методу, зокрема обмеження, пов'язані зі складністю обробки патологічного матеріалу і повільним розмноженням МБТ, а також з необхідністю використовувати для посіву дорогі живильні середовища. Це знижує цінність методу, не дає можливості оперативно використовувати отримані результати в клініці і диктує необхідність широкого пошуку як більш досконалих методів, так і більш досконалих поживних середовищ, які дозволили б прискорити отримання результатів і підвищити ефективність і чутливість методу [36].
МБТ - це живий організм з набором різноманітних і досконалих адаптаційних механізмів, що чутливо реагують на зміни навколишнього середовища.
пошкоджується зовнішньому впливу протистоять засоби біологічного захисту, що призводять до виникнення біологічно трансформованого варіанту збудника, виявлення якого вимагає нових методичних підходів. У сучасних умовах збудник туберкульозу проявляє широкий діапазон мінливості морфологічних, тинкторіальних, метаболічних, патогенетичних та інших властивостей. Тому застосовувані нині класичні методи виявлення збудника нерідко виявляються недостатньо ефективними, у зв'язку з чим все більшого поширення набувають методи цілеспрямованого виявлення і доказу видової приналежності біологічно змінених, у тому числі зернистих, ультрадрібних і L-форм мікобактерій.
До прямих методів виявлення МБТ можна віднести і бурхливо розвиваються в останні роки підходи, сутність яких полягає у виявленні в досліджуваних зразках діагностичного матеріалу специфічних фрагментів ланцюга ДНК збудника. Серед застосовуваних для цього молекулярно-біологічних методик найбільш широке поширення отримав метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР), в основі якого лежить багаторазове збільшення числа копій специфічної ділянки ДНК (так звана спрямована ампліфікація ДНК). Дуже високий рівень чутливості, що є головним достоїнством методу, досягається за рахунок того, що в результаті багаторазового копіювання рівень специфічної олігонуклеотидний послідовності в редакційній пробі зростає в 10 6 разів [16].
Метод особливо актуальний для туберкульозу, оскільки ефективний відносно збудників з високою антигенною мінливістю (у тому числі L-форм), визначення яких вимагає тривалого культивування або складних поживних середовищ, а також щодо внутрішньоклітинних паразитів і персистуючих мікроорганізмів. Поряд з цим методи ПЛР дуже перспективні при проведенні міжвидової і штаммовие ідентифікації мікобактерій для диференціації туберкульозних та нетуберкульозних мікобактерій (збудників микобактериозов), для експрес-визначення лікарської стійкості мікобактерій та епідеміологічного аналізу трансмісії збудника туберкульозу.
Однак застосування методу ПЛР чревато отриманням великої кількості хибнопозитивних результатів, обумовлених як технічними похибками, так і особливостями самого методу. Крім того, метод не дозволяє визначати ступінь життєздатності виявляються мікобактерій [16].
У зв'язку з цим ПЛР-діагностику МБТ представляється доцільно використовувати в практиці діагностичних лабораторій протитуберкульозних закладів тільки як додатковий експрес-метод для отримання орієнтовних результатів при обов'язковому паралельному застосуванні класичних мікробіологічних методів діагностики туберкульозу. Необхідність наявності висококваліфікованого персоналу, хорошо оснащених лабораторій з дотриманням вимог генної інженерії, безперебійної доставки високоякісних витратних матеріалів також буде стримувати широке поширення цього методу в Росії ще тривалий час.
Непрямі методи визначення наявності МБТ в організмі хворого засновані в основному на виявленні специфічних антитіл. Історично першим методом є туберкулінодіагностика, яка полягає у виявленні антитіл, фіксованих на клітинах (лімфоцити, мононуклеари), при взаємоді...
