В - втрата маси сировини при висушуванні [32].
Вміст води в живій рослині коливається в межах 81,1-88,6%. Проби після висушування подрібнювалися і піддавалися аналізу. Залишкова вологість сировини 8,5%. Кількісне визначення суми флавоноїдів проводили методом спектрометрії та рахували на абсолютно суху масу [33].
Тому замість В поставимо 90% - втрата маси сировини при висушуванні. У результаті формула буде мати вигляд:
Приготування буферного розчину з pH=3:
Спочатку треба приготувати 0,1М розчин HCI і 0,1М розчин глікоколу.
Для приготування 0,1М розчину HCI я скористалася готовим фіксатором або можна приготувати розчин так: в колбу об'ємом 1 літр наливаємо 3.61 г к.HCI і доводимо до мітки дистильованою водою.
Для приготування 0,1М розчину глікоколу необхідно 7,51 г речовини розчинити у воді, знову в колбі об'ємом 1 л. Спочатку присипати речовина, а потім довести до мітки.
Для приготування 200 мл буферного розчину необхідно взяти 50 мл 0,1М розчину глікоколу (гліцин або ацетоуксусная кислота) і 15,4 мл 0,1М розчину HCI і довести до 200 мл на один літр це буде 250 мл 0,1М глікоколу і 57 мл HCI, розбавити до 1000 мл [32].
Побудова калібрувального графіка.
Калібрувальний графік будували по стандартному розчин рутина. Розчин готують розчиненням 10 мл чистого рутина в 100 мл 80% етанолу. У мірний циліндр на 25 мл доливають: 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3 мл стандартного розчину і кожен доводять до 5 мл 80% розчину CH3COONa. Перемішують і залишають стояти в темному місці на 2:00. В одному мл отриманих розчинів міститься 0,002; 0,004; 0,006; 0,008; 0,01; 0,012 мг рутина. Для побудови калібрувального графіка відкладають на осі абсцис кількість рутина, на осі ординат величину оптичної щільності забарвлених розчинів.
Рис. 1. Калібрувальний графік по рутину для визначення суми флавоноїдів.
. 5 Методика визначення кількості аскорбінової кислоти
Близько 1 г (точна наважка) аналізованого рослинного матеріалу, подрібненого до розміру часток, lt; 2 мм заливали 20 мл 50% етанолу і екстрагували протягом доби. Потім витяжку відфільтровували через фільтрувальний папір і у фільтраті визначали вміст аскорбінової кислоти.
мл приготованого екстракту вносили в дослідну пробірку, додавали 3,8 мл 0,1М цитратного буфера pH=3,69; 0,05 мл 0,03м K [Fe (CN) 6]; 0,05 мл 0,5М NaF; 0,1 мл 0,074М FeCI3. Суміш витримували протягом 5 хвилин і спектрофотометріровалі в кюветі шириною 10 мм при?=700 нм на спектрофотометрі.
В якості контролю використовували розчини 1 мл фільтра, 4 мл 0,1М цитратного буфера pH=3,69 і 0,1 мл 50% етанолу; в якості другого контролю: 3,8 мл 0,1М цитратного буфера pH=3,69; 0,05 мл 0,03м K [Fe (CN) 6]; 0,05 мл 0,5М NaF; 0,1 мл 0,074М FeCI3.
Для побудови калібрувальної кривої використовували стандартні розчини аскорбінової кислоти. Для цього брали 20 мг аскорбінової кислоти і доводили дистильованою водою до 10 мл. У мірні колби на 25 мл вносили по: 0,5 мл; 1,0 мл; 1,5 мл; 2,0 мл; 3,0 мл. доводили розчини в кожній колбі до 5 мл дистильованою водою.
З цих розчинів брали по 1 мл і додавали 3,8 мл 0,1М цитратного буфера pH=3,69; 0,05 мл 0,03м K [Fe (CN) 6]; 0,05 мл 0,5М NaF; 0,1 мл 0,074М FeCI3. Для побудови калібрувальної брали розчини концентрацій аскорбінової кислоти в 0,05; 0,01; 0,015; 0,020; 0,025; 0,030. Кількість аскорбінової кислоти (С) розраховували за формулою:
=C * V1 * V2/P * V; мг/г
Де С - концентрація аскорбінової кислоти по каліброване графіком, мг/мл; - об'єм витяжки, мл; - обсяг дослідної суміші, мл; - навішування матеріалу, г; - об'єм витяжки, внесений у дослідну суміш.
Рис. 2. Калібрувальний графік по стандартному розчину аскорбінової кислоти.
. 6 Статистичні методи
Отримані результати обробляли за допомогою t - критерію Стьюдента [35].
. Число вимірювань n;
. Число ступенів свободи, f=n;
. Результат i-ого виміру xi;
. Середнє значення
. Дисперсія
. Середнє квадратичне відхилення
. Довірчий інтервал (при?=0,95, n=3, t=3,18).
Глава. 3. Результати та їх обговорення
Період збору та сушіння досліджуваних рослин (червень, липень) в Намском улусі характеризувався довжиною світлового дня.
