p>
2. 2. Визначення органічних сполук
Ферментатівниє методи визначення органічних сполук успішно розробляються і застосовуються в клінічних та біохімічних лабораторіях. Саме застосування ферментів дає можливість селективно визначати в крові, сечі, тканинах та інших біологічних об'єктах малі кількості таких метаболітів і фізіологічно активних речовин, як сечовина, сечова кислота, амінокислоти, цукру (в Зокрема, глюкоза), спирти, ліпіди, холестерин, нуклеотиди, антибіотики.
Ферментативне визначення сечовини засноване на реакції її гідролізу, що каталізується ферментом уреазою. Утворені продукти гідролізу - іони і можна визначати електрохімічно, фотометрически або флуоріметріческой. Групове визначення амінокислот засноване на використанні таких ферментів, як L-аміно-або D-амінооксідаза, які каталізують окислення амінокислоти киснем повітря до кетокислоти, пероксиду водню та аміаку. Останній далі визначають електрохімічно за допомогою NH3-чутливого газового електрода. Специфічне визначення окремих амінокислот можливо при застосуванні декарбоксилаз, дегідрогеназ, ліаз, трансфераз. Для визначення глюкози використовують кілька специфічних ферментативних реакцій, наприклад: 1) каталізуються глюкозооксідазой окислення її киснем повітря (або іншими окислювачами) до глюконової кислоти і пероксиду водню, 2) її взаємодія з АТФ з утворенням глюкозо-6-фосфату в присутності гексокінази. При використанні першої реакції визначення глюкози проводять або спостерігаючи за зменшенням кількості кисню в розчині за допомогою О2-чутливого електрода Кларка, або вимірюючи рН розчину, який змінюється внаслідок освіти глюконової кислоти, або визначаючи кількість утвореного пероксиду водню. Ферментативні методи визначення сахарози і інших дисахаридів засновані на використанні специфічних ферментів (інвертази, лактази), що перетворюють дисахариди на моносахариди, одним з яких є глюкоза. Далі глюкозу визначають за допомогою описаного вище методу. Ферментативне визначення етанолу засноване на використанні одного з двох ферментів: алкогольоксидази, каталізірующ їй окислення етанолу киснем повітря до ацетальдегіду і Н2О2, або алкогольдегідрогенази, у присутності якою спирт в реакції з НАД (никотинамидадениндинуклеотида) перетворюється на НАД "Н2. p> Визначення різних токсичних сполук, таких, як феноли, ароматичні аміни, фосфор-, сіркоорганічні з'єднання, є важливим завданням аналітичної хімії і в першу чергу пов'язано з проблемами контролю та охорони навколишнього середовища.
Деякі токсичні сполуки є субстратами специфічних ферментів, що дозволяє значно спростити підготовку проб складних за складом об'єктів аналізу. Наприклад, визначати сечовину у воді плавальних басейнів, грунті дозволяє використання уреази, для якої сечовина є високоспецифічним субстратом.
Однак в більшості запропонованих методів для визначення токсичних сполук використовують їх інгібуючу дію на ферменти. Наприклад, фосфорсодержащие пестициди виз...
