мазки фіксують 4% формалінова-спиртовим розчином протягом 30 секунд.
В· Обмивають в проточній воді і висушують.
В· Заливають пероксидазного реактивом на 5 хвилин.
В· Ретельно промивають у проточній воді і висушують.
В· дофарбовував барвником Романовського-Гимзи.
В· Мієлопероксидази виявляється в цитоплазмі клітин у вигляді коричневих гранул [20].
В) Спектрофотометричний метод визначення активності мієлопероксидази в клітинному лізаті Нф
Зміст MPO в лізаті Нф оцінюють кількісним спектрофотометричним методом з використанням 0,04% розчину ортофенілендіамін (ОФД) на фосфатному буфері з pH 5,0 і додаванням 0,33% розчину перекису водню в співвідношенні 20:1 за обсягом. Довжина хвилі 495 нм [36]. p align="justify"> В· Нф поміщають дистильовану воду; отримують клітинний лізат.
В· Проводять титрування лізата
В· Додають пероксидазний субстрат
В· Вимірюють оптичну щільність [44].
) Визначення активності кислої фосфатази
В лунки плоскодонного 96-ямкового планшета, що містив фіксовані клітини, вноситься по 50 мкл розчину паранітрофенілфосфата (ПНФФ-розчин, ICN). Для його приготування 0,09 г ПНФФ і 0,31 г NaCl розчинялося в 37 мл 1М натрій-цитратного буфера (рН 5,5). Зразки инкубируются при 37 В° С протягом 30 хв. Потім додаванням 0,2 М розчину NaOH по 100 мкл на лунку реакція зупиняється. Оптична щільність розчину вимірюється на спектрофотометрі "Multiscan Titertek Plus" ("Flow lab.") При довжині хвилі 405 нм. [51]. p align="justify">) Визначення активності цитохромоксидази
< p align = "justify"> Свіжоприготований субстратний розчин (до 10 мл 0,1 М ацетатного буфера, рН 5,5, додаємо 20 мг 3,3 *-diaminobenzidine (ICN), 100 мг MnCl2 і 300 мкл 0,33% перекису водню) по 100 мкл вноситься в лунки планшета, що містять фіксовані клітини. Планшет інкубується при кімнатній температурі протягом 10 хв, потім реакція зупиняється додаванням 10% розчину сірчаної кислоти по 100 мкл на лунку. Оптична щільність визначається на спектрофотометрі "Multiscan Titertek Plus" ("Flow lab.") При довжині хвилі 492 нм [39]. p align="justify">) Визначення активності лактатдегідрогенази
До адгезіроваться і фіксованим на пластику клітинам додається 100 мкл розчину iodonitrotetrazolium violet (йоднітротетразолій, ЙНТ, виробництва ICN) з концентрацією 2 мг/мл. Для цього 20 мг ЙНТ розчиняється спочатку в 0,5 мл 70 В° спирту, а потім додається 9,5 мл 0,1 М фосфатного буфера (рН 7...
