ливо небезпечно при градієнті низького тиску, так як бульбашка газу, що потрапив в клапанну систему і в насос, повністю порушує їх роботу. Нарешті, в градиентной системі існує досить помітний об'єм від місця формування градієнта розчинника до місця його надходження в колонку: зазвичай цей обсяг становить від 1 до 3 мл або більше, тому склад розчинника, що надходить в колонку, відрізняється від того, який формується в цей же час. При роботі на колонках малого діаметра (1-2 мм) і при невеликих витратах розчинника (10-200 мкл/хв) це призводить до ще більших відмінностям. Скрутно гомогенне змішання сильної і слабкої розчинників, що надходять в змішувач: недостатньо ефективне змішання і неоднорідність потоку викликають помітне збільшення шумів, що заважає використовувати чутливі шкали детектора. Нарешті, при градієнтному елюювання практично виключається використання рефрактометричних детектора, так як зміна показника заломлення при зміну складу розчинника призводить до порушення його роботи.
Вибір сорбенту і колонки для ГВЕЖХ також має свої особливості. Перш за все, колонка повинна швидко приходити в рівновагу з розчинником постійно змінюється складу як в процесі градієнтного елюювання, так і при поверненні до вихідного складу розчинника при підготовці колонки до нового аналізу. Якщо для старих колонок у рідинної хроматографії, що працювали одноразово, градієнт формувався і використовувався один раз, після чого сорбент у колонці замінювався свіжим, і це дозволяло застосовувати силікагель та оксид алюмінію, то для ГВЕЖХ ці сорбенти НЕ підходять, так як урівноваження їх зі слабким розчинником після градієнта занадто тривало. Однак сучасні звернення-фазні та інші щеплені сорбенти досить швидко приходять в рівновагу з вихідним розчинником після закінчення градієнтного елюювання, що дозволяє успішно використовувати їх для цих цілей. Час, необхідний для врівноваження колонки, для кожного сорбенту встановлюється експериментально по досягненню сталості часу утримування речовин, що входять до аналізовану суміш. Це годинник різна як для різних сорбентів, так і для різних за складом розчинників, і може коливатися від десятків до декількох сотень хвилин.
Нарешті, дуже важливо правильно вибрати розчинник та добавки для нього при ГВЕЖХ. Якщо при ізократіческой ВЕРХ невеликі домішки, присутні в розчиннику, приходять в рівновагу з сорбентом і зазвичай не дають помилкових піків або
збільшення шумів, то в ГВЕЖХ вимоги до чистоти розчинників значно жорсткіші. Наприклад, в випадку обернено-фазною ГВЕЖХ використання води, недостатньо очищеної від органічних забруднювачів, присутніх у природній воді або привнесених в процесі іонообмінного очищення або перегонки, призводить до появи набору інтенсивних піків, елюіруемих з колонки метанольного-водним або ацетонітрільно-водним градієнтом. Перегонка води часто призводить (якщо апаратура обрана невдало) чи не до зменшення, а до збільшення кількості та вмісту органічних забруднювачів, д...
