. 3 Поділ на дауексі 1-Х2 (С1)
Поділ у макромасштабі віконують на колонку 0,9 на 44 см, наповненої дауексом 1-Х2 (Сl-; 200-400 меш). Аніоногенній глікозаміноглікан (5-10 мг) застосовують у виде водяного Розчин, Завантажени колонку промівають дістільованою водою й застосовують східчасте градієнтне елюювання Розчин хлориду натрію з концентрацією, что збільшується. Цей метод дает поділ гіалуронової кислоти, гепарінсерсірчаної кислоти, хондроітін - 4-сульфату й гепарину. Кератансульфатів елююється 3 М розчин хлориду натрію й может буті такоже Повністю виділений.
У Удосконалення варіанті цього методу можливе проведення процесса в мікромасштабі. Для поділу 3-5 мкМ шкірного глікозаміноглікану беруть 400 мг дауекса 1-Х2 (100-200 меш) на колонку и елюювання віконують Із ЗАСТОСУВАННЯ лінійного сольового градієнта в 8 М розчіні сечовіні. Крім того, сечовіна зменшує до мінімуму НЕ електростатічні зв язки білків з іонітамі на Основі целюлоза. Прісутність 8 М розчин сечовіні в сольовому градієнті зрушує хроматографічні зони глікозаміногліканів убік более низьких утрімуваніх обсягів, указуючі тім самим, что во время відсутності сечовіні значний роль у процессе поділу Грають гідрофобні зв язки. У прісутності сечовіні пікі краще розширюють, что свідчіть про ті, что НЕ електростатічне зв'язування перешкоджає процесса поділу. Поділ мікрокількостей глікозаміногліканів на дауексі 1-Х2 є, согласно данім Деяк дослідніків, КРАЩА класичним варіантом методу, что вікорістає хлорид цетілпірідінію (без органічніх розчінніків).
молекулярні ефір гель хлорид
5.4 Поділ на ECTEOLA-целюлозі
Цей метод, розроблення Рінгертцом и Рейхард, Згідно БУВ розвинення іншімі досліднікамі. Поділ гіалуроновой кислоти, сульфатів хондроітіну ї гепарину можливий на колонці, наповненію ECTEOLA-целюлоза, Із ЗАСТОСУВАННЯ елюювання з концентрацією хлориду натрію в розведеній соляній кіслоті, что збільшується. У работе вікорістовувався східчастій Градієнт для поділу гіалуронової кислоти, хондроітін - 4-сульфату, хондроітін - 6-сульфату, дерматансульфату ї кератан-сульфату. Взагалі галактозаміногліка?? і можна елююваті з колонки Розчин мурашінокіслого амонію в аміаку более нізької концентрації, чім нужно для кератансульфатів.
. 5 Поділ на DEAE-целюлозі
Хоча в работе повідомлялося, что при хроматографії на DEAE-целюлозі пікі індівідуальніх глікозаміногліканів около одна до одного й что цею іоніт НЕ может буті рекомендований для поділу, проти Бразельман и Рамм розвили цею метод, у результате чего БУВ досягнутості й достатньо якісний поділ. Так, у методі, что вікорістовує хлорид цетілпірідінію елюювання віконувалі Розчин хлориду магнію з концентрацією, что збільшується. У цьом методі можна вікорістаті маленькі колонки (50X Х4,5 мм), и в цілому нужно НЕ более 50 мг Речовини (рис. 9). Очевидно, что в цьом випадка поділ хондроітін - 6-сульфату, хондроітін - 4-сульфату й дерматансульфату є неповна, но сульфат гепарину ї гіалуронова кислота розділяються чітко.
Рис. 9. Поділ глікозаміногліканів на DEAE -целлюлозі: А - глікозаміноглікані з аорти кролика (43,4 мг); Б - ті ж глікозаміноглікані, оброблені гіалуронідазою; В - зразки; ГК - гіалуронова кислота; Х - 4-С - хондроітін - 4-сульфат; ДС - дерматансульфат; Х - 6-С - хондроітін - 6-сульфат; Ге - гепарінів
У цьом методі, як и в багатьох других у хроматографії глікозаміногліканів, вікорістовувався східчастій Градієнт. Елюювання почінають Виконувати 0,2 М розчин хлориду магнію в 0,002 М розчіні оцтової кислоти, что спріяє віділенню гіалуронової кислоти. Цю стадію Використовують и в декількох других аналогічніх методах. Таким чином, Переваги й Недоліки хроматографії на DEAE-целюлозі можна сформулюваті в такий способ. Продуктивність колонки й достатньо висока, отже, цею метод более Підходить для препаративних цілей, чім для аналітичних. Цей метод такоже дозволяє вітягаті глікозаміноглікані Із сильно розведения розчінів, Які утворюються при работе Із природніми Речовини. У Деяк випадка сахарідні Речовини сильно втрімуються іонітом, что є причиною Утворення «хвостів» и заважає поділу. Відповідно до роботи ЦІ Труднощі могут буті переборені, если вікорістаті шари, что чергуються, DEAE-целюлоза ї Деяк других іонітів. Бразельман и Рамм думають, что ЦІ Перешкода НЕ є результатом Виникнення гідрофобніх зв'язків, як повідомлялі Ранее деякі досліднікі для випадка дауекс 1-Х2, оскількі! Застосування сечовіні віявілося неефективно для хроматографії на DEAE-целюлозі. При поділі на природній DEAE-целюлозі, звічайна, нельзя застосовуваті Органічні розчинники, Які вікорістовуваліся при поділі помощью хлорид цетілпірідінія.
. 6 Поділ на DEAE-сефадексі
