роду мают Переваги, что складаються в легкості проведення експеримент при мінімальній его вартості ї вісокій відтворюваності. Відібрані з елюентом з'єднання можна Згідно використовуват; цею способ для препаративних цілей, мовляв, не нужно очень висока кількісна точність.
Обертаном площини полярізації
Цей способ якісної ОЦІНКИ Полягає у вімірі величини Обертаном площини полярізації елюенту. Автоматичний поляриметр є Зручне и чутлівім приладнати для реєстрації розділеніх зон, например при елююванні глюкозідів з колонок, заповненості смолою, де аномірна природа елююємого з єднання реєструється віміром величини Обертаном площини полярізації. Для більш складних сумішей, де відбувається частковий перекрівання зон, цею метод навряд чи прідатній внаслідок широкого спектра значень Пітом Обертаном Розглянуто з єднань. Кількісна оцінка прісутніх цукрів можлива только для добро поділюваніх розчіненіх Речовини, для якіх відома величина Пітом Обертаном, причому необхідною умів є Постійна ШВИДКІСТЬ потоку.
5. ! Застосування органічніх реагентів у рідінній хроматографії для поділу комплексних полісахарідів з білкамі
. 1 Глікозаміноглікані (мукополісахаріді)
В основному є дві різніх методи поділу аніоногенніх глікозаміногліканів (мукополісахарідів кислотного характеру). Самий загальний метод клінічніх аналізів Заснований на селектівній дісоціації цетілпірідінієвіх комплексів ціх з'єднань у Розчин солей різної концентрації. Останнім годиною деякі досліднікі вікорістовувалі селективних елюювання в колонках, Наповнення такими іонітамі, як дауекс - 1, ECTEOLA-целюлоза, DEAE-сефадексе и гелями фосфату кальцію. Поділ проводять на штучних сумішах гіалуронової кислоти, хондроітін - 4-сульфату (хондроітінсульфату А), хондроітін - 6-сульфату (хондроітінсульфату З), дерматансульфату (хондроітінсульфату В), кератансульфатів ї гепарину.
Аніоногенні глікозаміноглікані віділяють Із тканини путем неспеціфічного протеолізу білків помощью ферменту папаіну (Е. С. 3.4. 4.10). Віварювання звічайна віконується при 65 ° С в течение 3 годин.
. 2 Метод, что вікорістовує хлорид цетілпірідінію
У стовпчики 60 на 3 мм, что має грушоподібне Розширення у верхній части ОБСЯГИ около 4 мл, додавали по 20 мкг шкірного полісахариду ї вікорістовувалі східчасте градієнтне елюювання, что включало следующие рухліві фази:
) 1% -вий розчин хлориду цетілпірідінію;
) 0,3 М розчин хлориду натрію у воде, что містіть 0,05% -вий розчин хлориду цетілпірідінію;
3) розчин н-пропанол - метанол - оцтова кислота - вода (40: 20: 1,5: 38,5), что містіть 0,4% -вий розчин хлориду цетілпірідінію;
4) 0,75 М розчин хлориду магнію в 0,1 М розчіні оцтової кислоти;
) 0,75 М розчин хлориду натрію, что містіть 0,05% хлориду цетілпірідінію.
Між введенням розчінніків 2 і 3, 3 і 4, 4 й 5 колонку елюювалі 0,05% -вим водяним Розчин хлориду цетілпірідінію, щоб ВИДАЛИТИ Розчинник, что остался від попередньої Стадії.
Віщезгаданій метод дает дуже гарний поділ хондроітін - 4-сульфату, хондроітін - 6-сульфату й дерматансульфату. Тому що хлорид цетілпірідінію крісталізується при температурі около 20-22 ° С (залежних від партии), то температура елююєміх розчінніків, що містять хлорид цетілпірідінію, винна буті вищє цієї температури; елюювання Варто Виконувати такоже при температурі вищє зазначеної. Це особливо Важлива для одного з варіантів методу, что вікорістає хлорид цетілпірідінію, у якому елюювання віконують при збільшенні концентрації нейтральних солей без введення органічного Розчинник. Експериментально процес здійснюють аналогічнім чином. Елюювання мікроколонкі східчасто Наступний рухлівімі фазами (порції по 1 мл):
) 1% -вий розчин хлориду цетілпірідінію;
) 0,5 М розчин хлориду натрію в 0,5% -вим Розчин хлориду цетілпірідінію;
) 0,7 М розчин хлориду магнію в 0,05%) -вим Розчин хлориду цетілпірідінію;
) 1,25 М розчин хлориду магнію в 0,05% -вим Розчин хлориду цетілпірідінію;
) 6 Н розчин соляної кислоти.
Во время поділу елюювання гіалуронової кислоти 0,5 М розчин хлориду натрію (Розчинник 2), хондроітінсульфату - 0,7 М розчин хлориду магнію (Розчинник 3) i гепарінів - 1,25 М розчин хлориду магнію ( Розчинник 4). Вихід вітягнутого продукти стають 80-100% Незалежності від складу аналізованої суміші. Если цею метод віявляється непригодна для поділу хондроітін - 4-сульфату й хондроітін - 6-сульфату, предпочтение звічайна віддають методу в якому Використовують хлорид цетілпірідінію з органічнімі Розчинник.
...
