пова схема газового хроматографа:
- система підготовки газів; 2 - система дозування;
- пристрій для введення проби; 4 - хроматографічна колонка; 5 - система детектування; 6 - блок живлення детектора; 7 -регістратор; 8 - вимірювач швидкості потоку газу-носія
Газова хроматографія дозволяє визначити мікрограммових і нанограммових кількості цих речовин. Безпосереднє введення біологічної рідини в хроматографічну колонку, як правило, не дає позитивних результатів. До виконання аналізу методом газової хроматографії необхідно здійснювати багаторазову екстракцію (частіше ефіром, хлороформом або етилацетатом) лікарської речовини або його метаболітів. [5]
Високоефективна або високошвидкісна рідинна хроматографія (ВЕРХ) відрізняється від газової хроматографії тим, що дозволяє відчувати сполуки, що володіють термічної нестійкістю і молекулярною масою більше 400. Для цих сполук виключається фаза перекладу в летючі похідні. Для ідентифікації лікарського препарату досліджуються в першу чергу екстракти з сечі і жовчі, оскільки, як правило, в цих об'єктах лікарські препарати присутні у високих концентраціях. Для кількісного визначення досліджуємо екстракти з крові, оскільки тільки для крові є дані по терапевтичним, токсичним і летальних доз. Рідина-рідинна екстракція в ділильних воронках, застосовувана в даний час, має ряд недоліків: необхідний великий обсяг біорідини (до 100 мл), велика витрата реактивів, многостадийность, тривалість (кров при підкисленні і подщелачивании утворює з екстрагентами стійку суспензію), неточність. Оскільки для дослідження методом ВЕРХ необхідно всього 5-10 мкл проби, нами досліджена можливість проведення одноразової екстракції лікарських препаратів з однієї проби крові (сечі і жовчі) об'ємом 0,6 мл в пробірках «Еппендорф». Пропонований метод має ряд переваг: значно знижує трудомісткість аналізу, знижує вартість аналізу за рахунок зменшення обсягів використовуваних реактивів, скорочує випадкові і систематичні помилки в процесі підготовки проб, вибірковий і чутливий. У порівнянні з тонкошарової хроматографією метод ВЕРХ вимагає менших витрат часу на виконання аналізу. Це зумовило широке впровадження методу в практику біофармацевтичного аналізу. [14,16]
. 2 Фотометричні методи аналізу
Найбільш часто в біофармацевтичному аналізі використовують фотометричні методи аналізу. Фотометричні методи аналізу засновані на виборчій поглинанні електромагнітного випромінювання аналізованих речовиною і служать для дослідження будови, ідентифікації та кількісного аналізу светопоглощающих з'єднань.
Залежно від використовуваної апаратури у фотометричному аналізі розрізняють спектрофотометричні методи - аналіз по поглинанню речовинами монохроматичноговипромінювання (спектрофотометрія, в УФ-, видимій та ІЧ-областях спектра); фотоколориметричні - аналіз по поглинанню речовинами немонохроматичного випромінювання (фотоколориметрія, екстракційна фотоколориметрія).
Порівняно рідко в біофармацевтичному аналізі використовують фотоколориметрія. Цей метод застосовують головним чином тоді, коли потрібно визначити великі концентрації лікарської речовини або суму лікарської речовини і метаболітів, що містяться в біологічної рідини. Недолік використання Фотоколориметричні методик полягає в порівняно невисокою їх точності.
Дуже перспективний більш чутливий екстракційно-фотометричний метод, заснований на екстракції лікарської речовини з біологічної рідини з подальшим взаємодією з кислотними або основними барвниками (бромтимоловим синім, метиловим оранжевим, бромкрезоловий зеленим та ін.). Утворені забарвлені продукти (іонні асоціати) нерідко специфічні для лікарської речовини і кількісно екстрагуються органічним розчинником (хлороформом, бензолом, дихлоретаном).
Найбільш часто в біофармацевтичному аналізі використовують спектрофотометрію в УФ- і видимій областях спектра. Цей метод відрізняється простотою виконання і достатньою точністю, не вимагає великої кількості операцій при підготовці до аналізу випробуваного зразка. [6,17]
Порівняно невисока чутливість спектрофотометричних методик (від 1 мкг/мл до 1 мг/мл) обмежує застосування даного методу для тих груп лікарських речовин, добова доза яких становить близько 1 м
Мас-спектроскопія - метод, що дозволяє визначити масу іонів, іонізованих молекул або фрагментів молекул по відхиленню в магнітних і електричних полях або по кінетичної енергії. Отже, перше, що треба зробити для того, щоб отримати мас-спектр, перетворити нейтральні молекули й атоми, складові будь-яку органічну або неорганічне речовина, в заряджені частинки - іони, цей процес називається іонізацією. На розробку способів іонізації органічних сполук були ви...
