його метаболіту. Іноді поєднують екстракцію органічним розчинником з наступною реекстракції (розчинами їдких лугів або кислот). [17,19]
Речовини, що містяться в отриманих екстрактах (реекстракт), визначають за допомогою фізико-хімічних методів аналізу.
. 1 Хроматографічні методи аналізу
Хроматографією називається процес розділення сумішей речовин, заснованих на кількісних відмінностях компонентів при їх безперервному перерозподілі між контактуючими фазами, одна з яких нерухома, а інша має постійний напрямок руху.
В основу класифікації численних хроматографічних методів покладено такі ознаки:
агрегатний стан фаз;
механізм взаємодії сорбент - сорбат;
способи проведення хроматографічного аналізу;
апаратурнеоформлення (техніка виконання) процесу хроматографування;
мета хроматографирования
За агрегатним станом фаз хроматографію поділяють на газову і рідинну. Газова хроматографія включає газожидкостную і газотвердофазную, рідинна - рідинно-рідинну і рідинно-твердофазних. Перше слово в назві методу характеризує агрегатний стан рухомої фази, друге - нерухомою.
За механізмом взаємодії сорбенту та сорбата можна виділити кілька видів хроматографії:
адсорбційна заснована на розходженні в адсорбованих речовин твердим сорбентом
розподільна заснована на різній розчинності речовин, що розділяються в нерухомій фазі або на різній розчинності речовин в рухомою і нерухомою фазах
іонообмінна хроматографія - на різній здатності речовин до іонного обміну
ексклюзивні хроматографія - на розходженні в розмірах і формах молекул поділюваних речовин;
аффинная хроматографія - на специфічних взаємодіях, характерних для деяких біологічних і біохімічних процесів (наприклад, антитіло і антиген, гормон і рецептор та ін.)
Існує осадова хроматографія, заснована на освіті відрізняються по розчинності опадів поділюваних речовин з сорбентом, адсорбційно-комплексообразовательная, заснована на утворенні координаційних сполук різної стійкості у фазі або на поверхні сорбенту, та ін. Слід пам'ятати, що класифікація за механізмом взаємодії досить умовна: її використовують у тому випадку, якщо відомий домінуючий механізм.
За технікою виконання виділяють колоночную хроматографію, коли поділ проводиться в спеціальних колонках, і площинну хроматографію, коли поділ проводиться на спеціальному папері (паперова хроматографія) або в тонкому шарі сорбенту (тонкошарова хроматографія).
У колонкової хроматографії використовують насадкові або капілярні колонки. Насадочное колонку заповнюють сорбентом (насадкою), а внутрішню стінку капілярної колонки покривають плівкою рідини або пилом адсорбенту.
Залежно від мети проведення хроматографічного процесу розрізняють:
- аналітичну хроматографію (якісний і кількісний аналіз);- Препаративну хроматографію (для отримання речовин у чистому вигляді, для концентрування і виділення мікродомішок);
промислову (виробничу) хроматографію для автоматичного управління процесом (при цьому цільовий продукт з колонки надходить в датчик). [4,17]
Класифікація за способами проведення аналізу підрозділяє хроматографію на три види:
) фронтальний;
) проявника;
) витіснювальний
Тонкошарова хроматографія (ТШХ) широко застосовується в біофармацевтичному аналізі, зважаючи високої роздільної здатності та чутливості (рис.2.1).
Рис.2.1. Тонкошарова хроматографія
Підвищити роздільну здатність тонкошарова хроматографія можна, використовуючи метод двовимірної хроматографії. Тонкошарова хроматографія відрізняється простотою виконання, однак при аналізі складних сумішей, що містять велику кількість компонентів, цей метод не завжди дозволяє досягти потрібного ефекту. Біофармацевтичний аналіз методом ТШХ найчастіше поєднують з УФ-спектрофотометрі і флуоресцентним методом (хроматоспектрофотометрія, хроматофлуоресценція). [4]
Газова хроматографія (ГФ) і широко застосовуваний її варіант - газорідинна хроматографія (ГРХ) - зважаючи високої чутливості, хорошою відтворюваності і точності стоять на одному з перших місць серед фізико-хімічних методів, використовуваних для аналізу лікарських речовин та їх метаболітів в біологічних рідинах. Головним приладом для цього методу досліджень є газовий хроматограф (рис.2.2.).
Рис.2.2. Принци...
