трачені значні зусилля, однак з усього їх різноманіття тільки два реально забезпечили можливість аналізу рідин і використовуються в сучасних мас-спектрометричних комплексах:
утворення іонів при розпиленні розчину аналізованого з'єднання в електричному полі (електроспрей) (рис.2.3);
десорбція іонів з органічної матриці лазерним випромінюванням (Малда)
Рис.2.3. Схема іонізації способом електроспрей:
МС - мас-спектрометричний; М - аналізована молекула; Н + - протон
Природно, прилади, які використовуються в цьому методі, називаються мас-спектрометри або мас-спектрометричні детектори (рис.2.4).
Рис.2.4. Схема мас-спектрометра
- система підготовки та введення досліджуваної речовини; 2 - іонний джерело; 3 - мас-аналізатор; 4 - приймач іонів; 5 - підсилювач; 6 - реєструючий пристрій; 7 - ЕОМ; 8 - система електричного живлення; 9 - відкачні пристрою.
Метод відрізняється дуже високою роздільною здатністю, в десятки разів перевищує інші методи. Це дозволяє проводити, наприклад, аналіз домішок при їх відносному змісті менш 10-9, визначати елементний і ізотопний склад проби з великою точністю. Відомі також різні варіанти мас-спектрометрії. [22]
Особливо гарні результати в біофармацевтичному аналізі були досягнуті при комбінованому застосуванні газорідинного хроматографа та мас-спектрометра в одному приладі (хромато-мас-спектрометрія). На основі такого поєднання був створений принципово новий метод аналізу трудноразделяемих сумішей - мас-фрагментографія. Суть методу полягає в тому, що мас-спектрометр використовується як високочутливий детектор до газової хроматографії. Основна перевага мас-фрагментографіі - надзвичайно велика чутливість, що досягає декількох пікограмів (1 пг=10-12г). Це в 1000-10000 разів вище, ніж у ГЖХ. Висока специфічність дозволяє аналізувати нерозділені компоненти цих сумішей, а висока чутливість дає можливість визначати метаболіти лікарських речовин, застосовуваних у дуже малих терапевтичних дозах. [7,22]
. 3 Методи, засновані на використанні магнітного поля
Спектроскопія ядерного магнітного резонансу (ЯМР) - метод, заснований на реєстрації індукованих радіочастотним полем переходів між ядерними магнітними енергетичними рівнями молекул речовини, поміщеного в магнітне поле. Метод дозволяє вивчати магнітні переходи ядер зі спіновими квантовими числами більше нуля (ядра 'Н, 13С, 19р, 31Р). Сукупність сигналів переходів між енергетичними рівнями ядер молекул становить спектр ЯМР. Кожен спектр ЯМР реєструється для одного типу ядер і специфічний для кожної речовини. Найчастіше використовують спектроскопію на протонах (ПМР) та ЯМР. Спектри реєструють за допомогою ЯМР-спектрометрів (рис.2.5).
Рис.2.5. Схема спектрометра ЯМР:
- котушка із зразком; 2 - полюси магніту; 3 -генератор радіочастотного поля; 4-підсилювач і детектор; 5 - генератор модулюючого напруги; 6 - котушки модуляції поля В0; 7 - осцилограф.
Спектр являє собою сукупність піків з різною шириною, площею та інтенсивністю сигналів. За характером протонних сигналів можна зробити висновок про наявність в молекулі тих чи інших груп атомів. Величина хімічного зсуву має порядок 10 ~ 6 або млн ~! (мільйонна частка). Метод ЯМР-спектроскопії використовують для об'єктивної ідентифікації органічних лікарських речовин і для кількісного визначення відносного вмісту речовини або домішки. Справжність може бути підтверджена або шляхом порівняння зі стандартним зразком, або по найбільш характерними сигналами спектра, або по повному набору спектральних параметрів. [24,23]
. 4 Люмінесцентні методи аналізу. Флуориметр
Люмінесценція, як явище відомо, давно, але її практичне застосування почалося тільки в кінці 19 століття, коли були сформульовані основні поняття і розроблені деякі її теоретичні положення. Під люмінесценцією розуміють світіння речовини, яка виникає після поглинання ним енергії збудження. Існує кілька способів класифікації люмінесценції:
За способом збудження розрізняють наступні види люмінесценції:
фотолюмінісценція - збудження електромагнітним випромінюванням оптичних частот;
хемілюмінесценція - збудження за рахунок енергії хімічних реакцій;
радіолюмінесценція - порушення під впливом різних видів радіоактивного випромінювання;
Рентгенолюмінесценція - збудження за рахунок енергії рентгенівських променів;
сонолюмінесценция - збудження при впливі інтенсивних звукових хви...
