регіону з допомогою тонкошарової хроматографії//Вест.Моск.ун-та, сер.2. Хімія 2004. Т 45. №6.151005-62% спиртовий розчин нінгідрінаДіханіна І.В, Айрапетова А.Ю, Лазарян Г.Д, Кількісне визначення амінокислот в пилку (обніжжю)//Хіміко-фармацевтичний журнал. Том 40, №20, 2006 За літературними даними час проведення реакції варіюється від 4 до 30 хвилин, температура нагрівання від 95 до 1000С, рH розчину від 5,0 до 6,4. Тому умови проведення реакції потребують уточнення.
2.3.1 Оптимізація pH розчину нингидрина
Була вивчена залежність аналітичного сигналу від pH розчину нингидрина. Для вимірювання pH використовували рН -метро-иономер «Експерт - 001» з комбінованим електродом. Прилад попередньо деградуватися по двом стандартним буферним розчинам (4,01; 9,18). Розчини нингидрина з різними значеннями pH готували додаванням в розчин нингидрина з pH 6,86 фосфорної кислоти (1:10) або 4М гідроксиду натрію.
Для проведення аналізу до 1,00 см3 0,12718 мг/мл розчину аланіну додавали 1,00 см3 дистильованої води і 1,00 см3 0,5% розчину нингидрина з різними значеннями pH. Нагрівали протягом 30 хвилин при температурі 100? C. Охолоджували до 200С. Додавали 10,0 см3 дистильованої води, розчини перемішували і визначали оптичну щільність на спектрофотометрі (таблиця 2).
Таблиця 2 - Залежність оптичної щільності від pH розчину нингидрина
№рHОптіческая щільність при? =568 нм.14,70,03925,10,05335,40,09045,60,12056,00,16166,40,19276,50,19786,70,19996,90,200107,10,194117,40,186127,80,172 Графік залежності аналітичного сигналу від pH розчину нингидрина представлений на малюнку 2.
Малюнок 2 - Залежність аналітичного сигналу від pH розчину нингидрина
На інтенсивність поглинання суттєво впливає реакція середовища. В інтервалі рН від 6,4 до 6,9 величини оптичної щільності практично не змінюються. Для експерименту була обрана величина рН 6,86.
2.3.2 Визначення температури проведення реакції
Реакція взаємодії?-амінокислот з нингидрином йде при нагріванні, тому необхідно було встановити оптимальну температуру проведення реакції. Для підтримки постійної температури в діапазоні від 50 до 100? C використовували водяний термостат, а в діапазоні температур від 110 до 155? C застосовували силіконову баню. Результати визначення представлені в таблиці 3.
Таблиця 3
Залежність аналітичного сигналу від температури нагріву
Температура нагріву,? CОптіческая щільність при? =568 нм700,029870,164910,168940,192960,193980,1941000,1961100,1931150,1941200,1981250,2001300,1981350,1901450,1751550,128
При температурі 50? C освіту синьо-фіолетового забарвлення не спостерігали. В інтервалі температур від 94 до 130? C оптична щільність розчину досягає максимального значення і не залежить від температури (малюнок 3). При подальшому нагріванні відбувалася зміна спектральних характеристик і зменшення Абсорбційну.
Малюнок 3 - Залежність аналітичного сигналу від температури
Для проведення аналізу була обрана температура 100 0 С.
. 3.3 Оптимальний час проведення реакції
Була вивчена залежність Абсорбційну від часу нагрівання розчину (малюнок 4). Реакцію проводили при температурі 100? C і pH розчину 6,86.
Малюнок 4 - Залежність оптичної щільності від часу нагрівання
Після 30 хвилин нагрівання Абсорбційну розчину залишається практично постійною. Для аналізу було обрано оптимальний час проведення реакції 30 хвилин.
Після охолодження досліджували стабільність забарвлення фіолетового Руеманна в часі протягом 30 хвилин (таблиця 4).
Таблиця 4 - Стабільність забарвлення фіолетового Руеманна в часі
Час, мін.Оптіческая щільність при? =568 нм50,205100,206150,206200,205250,207300,206 Аналітичний сигнал отриманого з'єднання не змінюється протягом 30 хвилин.
2.3.4 Визначення концентрації реагенту
Була вивчена залежність аналітичного сигналу від концентрації нингидрина (малюнок 5). У пробірку з притертою пробкою об'ємом 25,0 см3 поміщають 1,00 см3 0,17026мг/мл розчину треоніну, додають 0,25; 0,50; 0,75; 1,00; 1,50; 2,00 см3 1% розчину нінгіріна і доводять дістіллірванной водою до обсягу 3,00 см3 (таблиця 5).
Таблиця 5 - Залежність аналітичного сигналу від концентрації нингидрина
Обсяг треоніну, см3Об'ём нингидрина, см3Об'ём води, см3Концентрація нингидрина в розчині, мг/млОптічесая щільність раствор...
