а1,000,251,750,80,4361,000,501,501,70,5011,000,600,252,00,5061,000,701,002,30,4841,000,800,502,70,4681,001,001,003,30,4481,001,200,804,00,4241,001,300,704,30,4181,001,400,604,70,3981,001,500,505,00,382
Залежність аналітичного сигналу від концентрації реагенту представлена ??на малюнку 5.
Малюнок 5 - Залежність оптичної щільності від концентрації нингидрина
За результатами отриманих даних в інтервалі концентрацій від 1,7 до 2,3 мг/мл величини Абсорбційну розчинів мають максимальні значення і практично не змінюються. Для проведення аналізу була обрана концентрація нингидрина 2,0 мг/мл. Для отримання цієї концентрації додають 0,60 см3 1% розчину нингидрина до пробі. Загальний об'єм розчину 3,00 см3.
. 3.5 Дослідження спектральних характеристик продуктів реакції?-амінокислот з розчином нингидрина
Для проведення аналізу до 1,00 см3 розчину амінокислоти додають 1,40 см3 дистильованої води і 0,60 см3 1% розчину нингидрина, приготованого на фосфатному буфері з pH 6.86. Нагрівають протягом 30 хвилин при температурі 100? C. Після швидкого охолодження до температури 20? C знімають на спектрофотометрі спектри поглинання продуктів взаємодії нингидрина з різними?-аминокислотам (малюнок 6).
Малюнок 6 - Видима область спектра продуктів взаємодії?-амінокислот з розчином нингидрина
У видимій області спектрів поглинання продуктів взаємодії?-амінокислот з розчином нингидрина незалежно від природи амінокислоти на спектрах поглинання спостерігаються два максимуми (таблиця 6).
Таблиця 6 - Характеристика спектрів поглинання продуктів реакції?-амінокислот з розчином нингидрина
?-амінокіслотаМаксімуми спектрів поглинання, нмЛизин400,2565,0Валин401,0565,0Треонин401,1567,4Аланин401,0565,3Фенилаланин400,0565,0 2.3.6 Вплив аскорбінової кислоти на аналітичний сигнал
З метою розширення аналітичних можливостей Нінгідринова реакції, вивчено визначення амінокислот в присутності аскорбінової кислоти [47]. Аскорбінова кислота є досить сильним відновником (Ео=+ 0,18В), відновлює частина нингидрина, що сприяє підвищенню чутливості реакції і стабільності утворить пофарбованого з'єднання. Досліджували вплив аскорбінової кислоти на Абсорбційну проби (малюнок 7). При аналізі використовували стандартний розчин треоніну.
Малюнок 7 - Залежність оптичної щільності фіолетового Руеманна від концентрації аскорбінової кислоти
Встановлено, що використання в якості цветореагента нингидрина і проведення реакції в присутності аскорбінової кислоти, дозволяє підвищити чутливість реакції (малюнок 8).
Рисунок 8 - Спектри поглинання продукту реакції нингидрина з деякими?-аминокислотам
Введення в реакційну суміш аскорбінової кислоти дозволяє підвищити Абсорбційну. Аналітичний сигнал збільшується в середньому в 2 рази.
2.3.7 Вплив на аналітичний сигнал розбавлення проби
Розбавлені проби соку піддавали аналізу при встановлених раніше умовах. Аналітичний сигнал змінювався пропорційно ступеню розведення. При проведенні аналізу сік розбавляли в 20 разів, а сокосодержащий напій в 5 разів.
Запропоновані умови проведення Нінгідринова реакції з?-аминокислотам представлені в таблиці 7.
Таблиця 7 - Оптимальні умови проведення Нінгідринова реакції
Умови реакцііПоказателіpH6,86Температура,? C100Время, мін.30Концентрація реагенту, мг/мл2,0Концентрація аскорбінової кислоти, мг/мл0,3Разбавленіе соку1: 20Разбавленіе соковмісного напітка1: 5Дліна хвилі, нм568
2.4 Визначення аскорбінової кислоти
Так як в розробляється методикою для збільшення чутливості рекомендується додавання аскорбінової кислоти, необхідно оцінити концентрацію аскорбінової кислоти в аналізованих соках.
Визначення аскорбінової кислоти грунтується на окислюванні аскорбінової кислоти розчином 2,6-діхлорфеноліндофенолята натрію до дегідроаскорбіновою кислоти (малюнок 9). Так як реагент володіє і властивістю кислотно-основного індикатора, то в кінцевій точці титрування розчин набуває рожеве забарвлення, обумовлену забарвленням реагенту в кислому середовищі. Підкислення проби проводили соляною кислотою.
Рисунок 9 - Окислення аскорбінової кислоти розчином 2,6-діхлорфеноліндофенолята натрію
Результати аналізу яблучних соків на вміст аскорбінової кислоти представлені в таблиці 8.
Таблиця 8 - Вміст аскорбінової кислоти в яблучних соках
