orge та ін. Вказують фіолетово-пофарбований продукт, що утворюється при взаємодії HS - іона з ціано-аквакобінамідом [48]. Dolphin і Johnson використовували HS - іон як відновлювача у синтезі алкіл кобаламинов [49]. Firth та ін. Спостерігали максимуми поглинання при 352 нм і 530 нм при змішуванні гідроксікобаламін з розбавленим Na 2 S [50]. Так як одноатомна сірка має важливі фізіологічні функції і так як кобаламін - ідеальний кофактор у метаболізмі та транспортуванні цієї частки сірки, то опис похідного здається важливим. Дослідження, описані тут, відкривають цікаві похідні Cbl і Cbi, що містять стабільний Cо (II).
Коричневі продукти.
Коли гідрокси (або АКВО) форми Cbl або Cbi смешиваются з неорганічним сульфідом (H 2 S або HS -) при рН=5 - 9, колір переходить від червоного до коричневого протягом 15 хв при кімнатній температурі. У розведених розчинах, колір з'єднань добре помітний, Cbl-продукт має бордово-коричневе забарвлення, а Cbi-продукт має оранжево-коричневий колір. Реакція протікає однаково добре в аеробних або строго анаеробних умовах. CN-Cbl повільніше реагує з HS -, потрібно від 45 до 60 хв, щоб стало видно коричневий колір з'єднання при кімнатній температурі. CN-Cbi реагує по-різному, як описано нижче. АденозілCbl, метілCb1 або метілCbi не реагують з HS -, при відсутності освітлення. ОН-Cbl і OH-Cbi дають ті ж коричневі продукти, якщо вони спочатку відновлюються до стадії зеленого Co (I), з подальшим анаеробним додаванням елементарної сірки, розчиненої в киплячому етанолі. Всі реакції прискорюються якщо розчини підігріти.
Після завершення реакції (див. проміжні продукти нижче), кінцевий спектри поглинання показують максимуми або плечі поглинання (sh) при 270, 350, 415 і 528 нм для Cbl-похідного і при 263, 330, 434 , 490 (sh) і 650 нм для Cbi - похідного (Рис.10).
Рис.10. Електронний спектр поглинання у воді. Коричневий продукт з Cbl (a), коричневий продукт з Cbi (b); пунктирна лінія, продукт Cbl в 1,5 н HCI; вставка, незаряджена фракція Cbi після проходження через Dowex AG - 50-Na +, pH=7.
Спектри показують лише незначні зміни, оскільки значення рН змінюється від 2 до 10. У 1,5 н. HCl при кімнатній температурі Cbl - похідне стає оранжево-коричневим і спектральні зміни такі ж, як і для Cbi-похідного (Рис.10). Коричневі продукти є стабільними на повітрі і на світлі і можуть бути піддані очищенню без особливих заходів обережності, хоча тривале зберігання їх у воді призводить до незначного поверненню до початкового аквакобаламіну. Кристалізація дає гетерогенний продукт, що містить червоні напівпрозорі кристали і непрозорі чорно-коричневі гранули. Продукти містять сірку, яка вивільняється у вигляді H 2 S в присутності надлишку цистеїну з виходом 1 моль сірки на моль Корріна (похибка ± 6%). Продукт з Cbl не заряджений при значеннях рН від 3 до 10. Основний продукт з Cbi є позитивно зарядженим при рН=5. У доповненні до основного продукту, приготування Сbi демонструє різні кількості (від 0 до 20%) другого позитивно зарядженого похідного, який, крім заряду, має властивості, аналогічні властивостям основного продукту.
Проміжні продукти.
Освіта коричневих продуктів включає проміжні стадії, характер і тривалість яких залежить від природи Корріна, рН і температури. Результати, описані нижче спостерігалися при кімнатній температурі. При рН від 3 до 5 OH-Cbl дає тимчасовий проміжний продукт з такою ж абсорбцією, як і для органічних тіолових аддуктов (? Max=370, 515 і 545 нм). Фіолетовий колір перетворюється на коричневий протягом 15 хв і спектр поглинання розпадається, що показано на малюнку 10, протягом 24 годин. При рН від 5 до 9, фіолетового кольору не видно, але вихідний спектр поглинання показує максимум при 372 нм, який зникає протягом 24 годин. ОН-Cbi - фіолетовий интермедиат, який не стійкий при низьких значеннях рН, а в лужному середовищі немає ніяких доказів його існування, оскільки спектр швидко розпадається, що показано на малюнку 10. Препарати з ОН-Cbi і H 2 S містять різні кількості (від 10 до 25%) незарядженого коричневого продукту, який може бути відділений від основного продукту пропусканням через Dowex AG - 50-Na + (основний продукт зберігається). Незаряджених фракції з AG - 50-Na + мають спектр поглинання, що має кінцеву щільність і приховані піки (рис.10). Однак, коли додається CN -, це дає такі? ж блакитні і пурпурні продукти, як описано нижче, з чистим, добре визначеним поглинанням. Ця фракція містить 2 благаючи сірки на моль Корріна. Коли її очищають через Dowex AG - 2-Cl або через фенол, вона, мабуть, перетворюється в основний продукт, таким чином, після цих процедур, вона містить 1 моль сірки на моль Корріна. При цьому 98% фракції утримується AG - 50-Na +, і вона має поглинання, ідентичні основному продукту. Коли Na 2 S додають до розчину моноціано-Cbi п...
