ри рН 12, колір стає відразу ж фіолетовий (? Max=370, 548, 584 нм) і протягом декількох хвилин набуває насичений синій відтінок. Коли суміш нейтралізували до рН=7, колір з'єднання стає коричневим і посилюється з отриманням продукту, описаного вище.
ЕПР.
Коричневі продукти з Cbl і Cbi показують характерний ЕПР спектр Cbl (II) (рис.11).
Рис.11. ЕПР спектр. Цифри - g-значення в зазначених точках. (А) продукт з кобаламина; СВЧ-потужність 0,020 мВт; посилення приймача 1x10 4; інтегральний вихід Co (II) був більше, ніж 90%. (B) Початкова стадія реакції між ОН-Cbi і NaHS; після 1:00, суміш пропускали через колонку Dowex AG - 2-Cl для видалення надлишку HS - і заморожували для аналізу; СВЧ-потужність 0,2 мВт; посилення приймача 1,6x10 4; інтегральний вихід Co (II) сосатвіл 5%.
У таблиці 3, спостережувані ЕПР параметри порівнюють з опублікованими значеннями.
Таблиця 3. Порівняння спостережуваних і опублікованих ЕПР параметрів.
а Знайдені значення; b Стандарт Cbl (II) приготований фотоліз аденозил-Cbl; з опублікування значення Cockle та ін. [51]; d значення опублікування Bayston та ін. [52]; е Cbi (II) у присутності азотистого підстави, піридину; f з літератури, структури інтерпретовані, як мають азотна основа, координоване до кобальту, зване base on і структури, заснування в яких не координовано до кобальту, base off raquo ;; g тіоловий комплекс Cbl (II).
На початку реакційних сумішей, коли інтегральний вихід Co (II) склав 5%, другий сигнал рівної інтенсивності присутній при g=2,015 (ріс.11В).
Реакція з CN -.
Коричневі продукти дають унікальну реакцію з лужним ціанідом. При змішуванні з CN - при рН від 11 до 12, колір відразу ж змінюється незвично блакитний. Спектр поглинання синіх продуктів з Cbl і Cbi ідентичні і мають максимуми при 276, 321, 378, 566 і 597 нм. Сині похідні не є стабільними і протягом 30 хв при кімнатній температурі їх спектри перетворюються в спектри диціану-похідних (? Max=367, 540 і 580 нм) (рис.12). Перетворення показує ізобестіческіе точки при 342, 382, ??482 і 592 нм.
Рис.12. Реакція з CN -. Розчин коричневого продукту з Cbl, 0,01 М якого реагує з KCN, спектри записані при кімнатній температурі. Пунктирна лінія - спектр записаний за кілька сетів після змішування. Інші спектри запісивалілісь з інтервалами в 5 хвилин, крім останнього, який був записаний через 10 хв після передостаннього.
Формування синіх похідних та їх перетворення на диціану - похідні відбувається однаково добре в аеробних або анаеробних умовах. Сині похідні більш стійкі в лужному середовищі, в якій вони утворені; при рН=8 вони перетворюються на фіолетовий приблизно вдвічі швидше, ніж при рН=12 і, якщо забарвлений в синій колір розчин різко подкисляют до рН=4,5, то колір стає червоним з оптичною щільністю моноціано-Cbl (? max=360, 515, і 550 нм).
Властивості заряду синіх похідних дають можливість зрозуміти їх особливості. Наступні зауваження відносяться до похідних Cbi, тому що вони не ускладнені негативно зарядженими фосфатними групами. Результати були отримані з м'яким анионитом, DEAE-целюлоза, бо полістеріновий обмінник (наприклад, AG - 2-OH) перетворює сині похідні в червоно моноціановие форми (мабуть за допомогою видалення HS - групи):
. Коли синє похідне Cbi наноситься на DEAE-целюлозу при рН 10,5, воно утримується в дискретної блакитний смузі. Коли колону безперервно промивають водою і спостерігають, що синя смуга перетворюється у фіолетову протягом 30 хв, але не елюіруются. Якщо потім наноситься розбавлений KCN, пурпурна смуга елюіруются негайно.
. Якщо реакційною сумішшю (коричневе серосодержащие похідне Cbi + CN -) досягається фіолетовий колір (? Max=367, 540, 580 нм) до нанесення на DEAE целлюлозную колонку, то фіолетовий колір не зберігається.
. Як описано вище, продукт синього кольору утворюється також при додаванні Na 2 S до CN-Cbi при рН 12. Коли ця пофарбована суміш наноситься на DEAE - целюлозу, синьо-фіолетовий колір зберігається в дискретної смузі. Таким чином, показані два різних фіолетових з'єднання з дуже схожими спектрами поглинання - діціанід (незаряджений, стабільний,? Max=367, 540, 580 нм), утворений в присутності надлишку CN - і інше з'єднання (негативно заряджене, нестабільне,? Max=370 , 548, 584 нм), утворене c участю CN - і S 2-.
Опис механізму утворення коричневих похідних та їх взаємодія з CN -.
Алкілтіоли додані до кобаламина в кислому середовищі дають аддукти фіолетового кольору. У лужному середовищі, один електрон переходить з сірки на кобальт, утворюються при цьому Cb...
