> Підготовка хроматографічної колонки. Скляну колонку, заповнену готовим сорбентом (кількість нерухомої фази 3 ... 5% від маси носія) довжиною 2 м і внутрішнім діаметром З мм встановлюють у термостаті хроматографа і проводять термокондіціонірованіе при продуванні потоком газу-носія (гелій, азот, водень) 2 год при 100 В° С, 2 год при 150 В° С, 4 год при 200 В° С і 8 год при 250 "С. Потім встановлюють робочий режим: температуру колонки профамміруют від 125 до 270 В° С зі швидкістю 4 В° С в 1 хв, температуру випарника 250 В° С, витрата газу-носія 40см 3 /хв, температура полум'я-іонізаційного детектора 250 В° С, продовжують кондиционировать протягом робочого дня.
3.2. Газохроматографическое визначення. 1 мкл пиридинового розчину тріметілсілільних похідних вуглеводів вводять у випарник і елююють з колонки газом-носієм. Ідентифікацію індивідуальних тріметілсілільних похідних проводять за часом утримування тріметілсілільних похідних цукрів-мітчиків і методом добавок.
3.3. Приготування стандартних розчинів цукрів.
3.3.1. Сахара, що мають аномери. Наважку ксиліту і навішення визначається цукру, взяту з точністю 0,0001 г, поміщають в конічну колбу і заливають дистильованою водою до повного розчинення вуглеводів. Розчин витримують протягом доби. Аликвотную частина розчину відбирають піпеткою, поміщають в круглодонну колбу і упарюють досуха, після чого проводять сілілірованіе.
3.3.2. Сахара, що не мають аномеров. Сіліліруются без попереднього розчинення. p> Масову частку окремих цукрів (у%) в навішуванні продукту визначають за формулою:
В
де С, - зміст окремого цукру в навішуванні,%; До 1 - поправочний коефіцієнт даного цукру; С - маса навішення стандарту, мг; m - маса наважки зразка; А з - площа піку стандарту у відносних одиницях; Л з - площа піку даного цукру у відносних одиницях.
З огляду на те, що альфа-лактоза і сахароза виходять на хроматограмме одним піком, площа піку альфа-лактози визначають, виходячи з співвідношення площ альфа-і бета-лактози в модельному з'єднанні лактози. За основу береться площа піку бета-лактози. Площа піку сахарози визначають відніманням від сумарного піку сахарози піку альфа-лактози, з піку бета-лактози. За остаточний результат приймають середньоарифметичне результатів двох паралельних визначень і округлюють до тризначною цифри.
В
Кількісне визначення цукрів по реакції з пікринової кислотою (по Крезеліус - Зейферт)
При взаємодії редукуючих цукрів з пікринової кислотою вони окислюються до відповідних кислот, а пікринова кислота відновлюється в пікраміновую, що володіє червоною або буро-червоною забарвленням:
В
Метод придатний для кількісного визначення глюкози, галактози, арабінози, фруктози, рамнози, ксилози, мальтози, лактози і крохмалю. Метод швидкий, але не дуже точний. Помилка може перевищувати 10-20%. У зв'язку з цим зазначений метод має орієнтовний значення;
Реактиви і прилади: а) пікринової кислота, насичений розчин, б) вуглекислий натрій, 20%-ний розчин; в) спектрофотометр. p> Хід роботи: До 1 мл випробуваного розчину (у якому повинно міститися її більше 3 мг редукуючих цукрів) додають 2 мл насиченого водного розчину пікринової кислоти і 1 мл розчину вуглекислого натрію, після чого пробірку переносять на 30 хв. в киплячу водяну баню. Охолоджують до кімнатної температури і доводять дистильованою водою до об'єму 10 мл. Оптичну щільність розчину визначають при 455 нм (синій світлофільтр). Зміст редукуючих цукрів розраховують за калібрувальною кривою, складеної за стандартними розчинів глюкози як у роботі В«Кількісне визначення цукрів по антроновому методуВ». p>
Визначення редукує загального цукру по реакції з 3,5-дііітросаліцнловой кислотою
При взаємодії цукрів з 3,5-дінітросаліціловой кислотою вона відновлюється в З-аміно-5-нітросаліцнловую:
В
У іншому реакція протікає так само, як і з пікринової кислотою. p> Реактиви і прилади: а) дінітросаліціловий реактив:
У мірній колбі на 1 л розчиняють в дистильованої води 10 г 3,5-дінітросаліціловой кислоти, 300 г сегнетової солі, 16 г їдкого натру і доводять водою до мітки. Розчин витримують два дні в темному місці, потім фільтрують в склянку помаранчевого скла і зберігають у темряві;
б) спектроколоріметр В«Сп екол В»(НДР).
Хід роботи: До 1 мл випробуваного розчину (де не більше 2 мг редукуючих цукрів) додають 2 мл дінітросаліцілового реактиву, нагрівають 5 хв. в киплячій водяній бані, охолоджують до кімнатної температури, після чого доводять до обсягу 25 мл. Оптичну щільність розчину визначають при 530 нм (Зелений світлофільтр). <В
Антроновий метод визначення цукрів (по Морісу-Рое)
Антроно...
