сть постановки тесту. В якості контролю використовують менінгококову вакцину серогрупи А або С з гомологичной сироваткою, в концентрації 10 - 20 мкг/мл. Приготовану платівку поміщають в апарат для іммуноелектрофореза на 20 - 30 хв. при силі струму 12 - 15 МА на 1 склі. Апарат працює при кімнатній температурі. При позитивній реакції через 10 хв. після вимкнення струму, між лунками (з однією з сироваток і ликвором) з'являються лінії преципітації, які добре видно в прохідному світлі. У разі, коли антигену мало, лінії преципітації проявляються на наступні добу (платівка перебуває у вологій камері). Для прискорення цього процесу в Того ж дня, можна 2 - +3 рази пропускати струм через пластинку протягом 5 - 10 хв, тобто час аналізу збільшується до 60 хв. br/>В В
Використанню реакції непрямої гемаглютинації (РНГА) для виявлення антитіл при менінгококової інфекції
Показання до проведення серологічних досліджень
РНГА з менінгококової еритроцитарних діагностикумами серогруп А, В і С проводять в наступних випадках:
а) як додатковий метод діагностики менінгококової інфекції. Обов'язковою вимогою є дослідження сироваток крові від хворих, взятих в різні терміни від початку захворювання, тобто в динаміці (на початку захворювання, на 7 і 15 день хвороби).
б) для ретроспективного виявлення локалізованих форм менінгококової інфекції у вогнищах захворювання;
в) при проведенні імуно-епідеміологічних досліджень серед населення з метою визначення співвідношення серонегативного і серопозитивних контингентів;
г) при оцінці імунологічної ефективності протівоменінгококковой вакцинації.
Методика постановки РНГА з еритроцитарними менінгококової діагностикумами
РНГА можна ставити як макро-, так і мікрометодом, в останньому випадку використовують тільки мікротитратор системи "Такач".
Відмінності між цими методами полягають лише в обсягах використовуваних інгредієнтів і терміни обліку результатів реакції. При макрометод реагує суміш у кожній лунці складається з 0,5 мл відповідного розведення сироватки крові і 0,25 мл диагностикума. У мікрометодом обсяги відповідно зменшуються: 0,05 мл сироватки і 0,025 мл диагностикума.
Облік результатів дослідження в мікротитратор проводять через 2 години інкубації в термостаті; при макрометод іноді потрібна додаткова експозиція протягом 1 - 2 годин при кімнатній температурі.
При постановці РНГА можна використовувати багатоканальні піпетмани із зазначеними обсягами інгредієнтів.
Взяття крові
Для проведення серологічних досліджень кров від хворих ГФМІ або з підозрою на цю інфекцію забирають з ліктьової вени з дотриманням звичайних правил асептики; при масових серологічних дослідженнях кров беруть з пальця.
Після утворення згустку, отриману сироватку відсмоктують стерильною піпеткою в стерильну посуд (пробірку, ампули). Зберігають сироватку крові в холодильнику при +4 0 С. У реакції досліджують сироватки крові без ознак пророста. p> Перед постановкою РНГА сироватки розводять 1:5 вихідним буфером (ЗФР). Титрування сироваток проводять у стабилизирующем буфері.
Облік реакції
Реакцію оцінюють за загальноприйнятої 4-х плюсової системі.
За титр протівоменінгококковой антитіл беруть максимальне розведення сироватки крові, в якому спостерігають чітко виражену аглютинацію еритроцитів з інтенсивністю не менше, ніж на 2 +, за умови, що в попередніх лунках реакція йшла на 4 + або 3 +.
Сироватки крові з розведення 1:5 і вище з чітко вираженою агглютинацией еритроцитів, оцен івают як позитивні.
Рекомендовані терміни, кратність обстеження і трактування серологічних результатів
При виборі оптимальних термінів і кратності обстеження хворих ГФМІ і для правильного трактування серологічних результатів необхідно брати до уваги ряд факторів, впливають на рівень антитіл: вік хворого, преморбідний фон, клінічну форму, тяжкість і період хвороби; супутні захворювання, серологічні особливості збудника. При менінгококовій інфекції, так само як і при інших інфекційних захворюваннях, правильна оцінка результатів серологічних досліджень може бути дана тільки при їх зіставленні з епідеміологічними і клінічними даними.
Оптимальні терміни взяття крові у хворого ГФМІ - перші дні хвороби (1-3 день), друга, третя і подальша тижня хвороби.
Першу сироватку крові необхідно брати відразу ж при надходженні хворого в стаціонар, наступні через 7 - 10 днів.
В В
РНГА при генералізованих формах менінгококової інфекції
РНГА з діагностикумами А і С
Антитіла до группоспецифических полисахаридам менінгококів серогруп А і С при ГФМІ можна виявит...
