з порожнини черепа), в стерильну пробірку в кількості 3 - 5 мл і негайно висівають на чашки з поживними засобами. У кількості 0,1 мл досліджуваний матеріал наносять в центр чашки і розподіляють по її поверхні погойдуванням, розтирати шпателем не рекомендується.
Треба мати на увазі, що зростання на чашках може бути змішаним через потрапляння непатогенної мікрофлори, тому до загальноприйнятого набору поживних середовищ слід додати чашку сироваткового агару з антибіотиком (рістоміцін, лінкоміцин).
Гній з мозкових оболонок беруть стерильним ватним тампоном і засівають газоном або штрихами на чашки з шоколадним сироватковим агаром і в пробірку з середовищем збагачення, роблять 2 мазка на предметних стеклах, один з яких фарбують метиленовим синім, інший - за Грамом.
Для взяття матеріалу з мозку та інших органів до місця розрізу торкаються розжареним шпателем, матеріал беруть з глибини розрізу стерильним ватним тампоном. Посів роблять звичайним способом на ті ж щільні і рідкі поживні середовища.
Крім посівів з мозку, доцільно проводити вивчення мазків-відбитків з поверхні м'яких мозкових оболонок. Після підсушування та фіксації над полум'ям пальника (при тривалому зберіганні - в ацетоні) мазки забарвлюють і переглядають.
Методи серологічної ідентифікації менінгококів або їх антигенів
Реакція аглютинації в полістиролових пластинах
При постановці реакції аглютинації (РА) використовують полістиролові пластини або великі скла. Для кожної випробуваної культури менінгококів використовують один ряд лунок пластини. Число горизонтальних лунок відповідає числу аглютинуючих группоспецифических сироваток. Рідку сироватку кожної серогрупи в лунці розводять вдвічі (1 крапля сироватки + одна крапля суспензії культури). В окремій лунці кожного ряду готують суспензію досліджуваних культур. Для цього запаяної зігнутої пастерівської піпеткою бактеріальну масу знімають з чашки Петрі і ретельно емульгують в фізіологічному розчині. Для отримання оптимальної робочої густоти до суспензії додають по 1,0 мл фізіологічного розчину. Суспензія розносять по 1 краплі в горизонтальні лунки.
Пластини струшують протягом 1 хв. руками або шуттеле-апараті. Враховують реакцію протягом перших 3-х хвилин. Контролем служить лунка, в якій готують вихідну суспензію бактерій в фізіологічному розчині.
Реакція мікропреципітації для визначення серогрупи менінгококів
У чашку Петрі або скляну пластинку розміром 9 * 12 см наливають 20 мл, а на предметне скло - 5 мл розплавленого 1% агару на фізіологічному розчині. У застиглому агарі з допомогою металевих трубок просікають отвори (лунки) діаметром 3 мм, з яких агарові пробки видаляють шляхом відсмоктування цієї ж трубкою або вістрям голки. Відстань між центрами лунок 0,5 см. Лунки в агарі розташовують наступним чином: у центральну лунку пастерівської піпеткою наливають сироватку, в периферичні - прогріті при +100 0 С протягом 15 хвилин суспензії піддослідних культур. Мікробну кип'ячену суспензія можна зберігати в холодильнику в протягом 2-х тижнів. Для реакції мікропреципітації використовують не розведені сироватки.
Концентрація випробуваної добової культури менінгококу, вирощеної на 20% сироватковому агарі, повинна становити 30 - 60 одиниць, тобто бути в 3 - 6 разів гущі оптичного стандарту каламутності в 10 одиниць. Чашки Петрі або скляні пластини з лунками, заповненими сироваткою і антигенами, поміщають у вологу камеру (ексикатор з водою) на 24 - 48 годин при +20 - +22 0 С. По закінченні терміну враховують реакцію. Реакція проявляється тільки зі штамами менінгококів гомологичной серогрупи у вигляді лінії преципітації.
Метод ВІЕФ
У хворого гнійним менінгітом, бажано до застосування хіміотерапії, беруть СМЖ, яку досліджують на присутність специфічного полісахаридного антигену. Для цього використовують апарат для іммуноелектрофореза ПЕФ-3 або інший будь-якої марки. У апарат заливають "камерний" веронал-медіналовий буфер, що містить в 1 л дистильованої води 21,9 г мединал і 3,45 вероналу (веронал треба гріти на водяній бані до повного його розчинення) рН = 8,6. Приготований 1% агар, розтоплений і охолоджений до +60 0 С, наносять в кількості 20 мл на поверхню скляної пластинки, розміром 9 * 12 см, вміщену на горизонтальний столик. Після застигання агару пробійником або металевою трубкою, діаметр якої дорівнює 3 мм, висікають 2 паралельних ряду отворів на відстані 3 мм один від одного, по числу групових сироваток. Ряди розташовують перпендикулярно до напрямку сили струму.
Антисироватки вносять до лунки, розташовані з боку анода (+), а спинномозкову рідину в лунки зі боку катода (-).
Сироватку вносять у окрему лунку. В окрему лунку поміщають завідомо позитивний контроль, який дозволяє оцінити правильні...
