молекул. Здатність давати точну інформацію може бути надзвичайно важлива для визначення і характеристики білків. Наприклад, білок часто може бути однозначно визначено точним аналізом мас складових його пептидів (отриманих хімічним або ж ферментативним впливом на зразок).
[4]
Таблиця 1.4. Переваги та недоліки методу лазернойдесорбціі/іонізації за допомогою матриці (MALDI).
Переваги
Недоліки
В§ практичний діапазон мас до 300000 Da . Примірники зі значно більшою масою спостерігалися за допомогою детектора високого струму;
В§ звичайна чутливість порядку декількох фемтомоль або навіть пікомоль. Можлива чутливість до аттомоля;
В§ м'яка іонізація з малою фрагментацією;
В§ нечутливий до солей в концентраціях до міллімолярних;
В§ зручний для аналізу складних сумішей
В§ фон матриці, який може бути проблемою для з'єднань з масою нижче 700 дальтон. Перешкоди цього фону сильно залежать від матеріалу матриці;
В§ можливо фоторазложенія при лазерній десорбції/іонізації;
В§ кислотні матриці, використовувані в MALDI можуть викликати розкладання деяких з'єднань
В В В В
Приготування зразка і матриці значно впливає на якість мас-спектрів MALDI білків і пептидів ( рис. 1.15 ). Серед великої різноманітності відомих методів приготування найчастіше вживаним є метод висушеної краплі. У цьому випадку насичений розчин матриці змішується з розчином аналіту так, щоб співвідношення матриці до аналіту було близько 5000:1. Аліквоту (0.5-2.0 мкл) такої суміші потім поміщається на місце зразка, де потім висушується. Нижче наведено методику такого приготування:
В· відібрати піпеткою 0.5 мкл зразка на підкладку;
В· відібрати піпеткою 0.5 мкл матриці на підкладку;
В· перемішати зразок і матрицю втягуванням їх у піпетку і випусканням;
В· дозволити висохнути на повітрі.
В§ Для пептидів, невеликих білків і більшості інших сполук: насичений розчин О±-ціано-4-гідроксикоричні кислоти в 50:50 ацетонітрил: вода з 0.1% ТФА.
В§ Для білків та інших важких молекул: насичений розчин сінапіновой кислоти в 50:50 ацетонітрил: вода з додаванням 0.1% ТФА.
В§ Для глікопептидів/білків і маленьких сполук: насичений розчин 2,5-дігідроксібензойной кислоти (DHB) в 50:50 ацетонітрил: вода. p> Рис. 1.15. Звичайно використовувані в MALDI матриці і підкладка для MALDI з показаним розташуванням матриці. Однією з переваг MALDI є те, що безліч зразків може бути підготовлено в ...
