luka ChemicaВ» (Швейцарія) і В«AldrichВ» (Німеччина), триетиламін виробництва фірми В«Sigma-AldrichВ» (США), Піренеї-1-метиламін, люб'язно наданий ..., солі хлорид магнію, хлорид натрію, хлорид кальцію, ацетат натрію , перхлорат літію персульфат амонію кваліфікації В«ОСЧВ», інші реактиви мали кваліфікацію не нижче В«хчВ».
У роботі використовували ферменти: ДНКаза I, вільна від РНКаз, виробництва фірми В«FermentasВ» (Литва), зворотна транскриптаза (ревертаза) MuML-V і термофільна Taq-полімераза (Taq-pol), люб'язно надані Ходирєвою С.М.
Використовувані розчинники: DMSO (абс.), ацетон (В«ОСЧВ»), діетиловий ефір, етанол (перегн., 96%), метанол (перегн.).
Всі буфери, використані в роботі, були профільтровані через нітроцелюлозні мембрани фірми В«MilliporeВ» з діаметром пор 0,45 мкм.
2.2 Олігонуклеотиди, що використовувалися в роботі
У роботі були використані олігонуклеотиди, зазначені в таблиці 2:
Таблиця 2. Послідовності використовуються в роботі олігонуколеотідов. p align="justify"> EGFP-A5 -ACTTGTGGCCGTTTACGTCGC-3 5 p- EGFP-A5 -pACTTGTGGCCGTTTACGTCGC-3 EGFP-B5 -GAACTTCAGGGTCAGCTTGCCG-3 5 p-EGFP-B5 -pGAACTTCAGGGTCAGCTTGCCG-3 Scr-15 -CTTTCGGTAGCATAGCATCGTCTA-3 5 p-Scr-15 -pCTTTCGGTAGCATAGCATCGTCTA-3 EGFP-15 -AGAAGAACGGCATCAAGGT-3 EGFP-25 -GGTGCTCAGGTAGTGGTTGT-3'EGFP-35 -GAACGGCATCAAGGTGAA-3'EGFP-55 -ACCACTACCAGCAGAACACC-3'EGFP-65 -GGTCACGAACTCCAGCAG-3 < span align = "justify"> Випадковий гексарібонуклеотід (В«гексапраймерВ») Випадкова послідовність рибонуклеотидов
Олігонуклеотиди були синтезовані в ІХБФМ СО РАН і очищені за допомогою ВЕРХ. Чистоту олигонуклеотидов тестували за допомогою електрофорезу в 18% GFFU в денатуруючих умовах, візуалізацію олігонуклеотидів в гелі проводили за допомогою фарби В«Stains-AllВ». p align="justify"> 2.3 Буферні розчини, що використовувалися в роботі
Таблиця 3. Склад буферних розчинів, що використовувалися в роботі. p align="justify"> TBE0, 09 М Tris; 0,087 М H3BO3; 2мМ ЕДТА, pH = 8,0 Буфер для ДНКази I10 мМ Tris HCl, pH = 7,0; 0, 1мМ CaCl2; 10 мM MgCl2Буфер для от50 мМ Tris
