>
С=Едос / Екал * 442
Де С - концентрація креатиніну в пробі, мкмоль / л
- калібрувальна концентрація креатиніну, мкмоль / л
Едос - оптичні щільність дослідної проби, од. опт. щільності
Екал - оптичні щільність калібрувальної проби, од. опт. Щільності
2.5 Метод визначення Загальної актівності лактатдегідрогеназі в гомогенаті та сечі щурів
Визначення актівності лактатдегідрогеназі проводили помощью діагностичних наборів реактівів виробництва «Філісіт-Діагностика» (Україна, Дніпропетровськ).
Принцип методу базується на оптімізованому стандартному методі відповідно до вимог DGKS (Німецького Товариства Клінічної хімії) i модіфікованій відповідно до рекомендацій SCE (Скандинавсько комітету по Ензим) [5,8].
Піруват + НАДН + Н?? Лактат + НАD +
НАДН та NAD-дві ??форми?-Нікотінамін аденін дінуклеотіду
Піруват перетворюється в лактат з одночаснім окислюваності НАДН.Швідість Зменшення абсорбції при 340 нм, что зв `язана з окислюваності НАДН, прямо пропорційна актівності ЛДГ у пробі [5].
реактиви:
. буферних розчин ЛДГ (P1) ph (7,4 ± 0,2) - 4 флакони з (20 ± 1) мл
ТРІС (62,5 ± 3,125) ммоль / л;
Піруват (1,5 ± 0,075) ммольл;
ЕДТО (6,25 ± 0,3125) ммольл; 1 флакон з (20 ± 1) мл;
. Стабілізуючій розчин
гідроокіс натрію 0,01 Н
. Субстрат НАДН 1 мікропробірка з (16 ± 2) мг
Проведення аналізу:
Перед качаном Реакції кювету и розчини нагріті до необхідної температури ПРОТЯГ 5 хв.Прі вімірюванні оптічної щільності нужно підтрімуваті постійну температуру (± 0,5 ° С).
Дослідження проводили за схемами, что представлені в таблиці 2.4., 2.5, 2.6.
Таблиця 2.4 Запуск Реакції з субстратом
ТемператураПлюс 25? З чі плюс 30? Сплюс 37? СПіпетуваті, мклмакромікромакромікроБуферний розчин (Р1) Зразок4000 1001000 204000 501000 10Перемішаті, інкубуваті 1 хв, потім додатіРозчін субстрату (Р2) 10002501000250
Таблиця 2.5 Запуск Реакції зразки
ТемператураПлюс 25? З чі плюс 30? СПлюс 37? СПіпетуваті, мклмакромікромакромікроМонореактив (Р1) + (Р2) Зразок5000 1001000 205000 501000 10В обох випадка перемішаті, візначіті абсорбцію інкубаційної Суміші 1,2 и 3 хв проти Повітря або дістільованої води. Обчісліті ШВИДКІСТЬ Зміни оптічної щільності реакційного Розчин-??/Хв.Запуск Реакції субстратомПлюс 25? З або 30? СПлюс 37? СДовжіна Хвилі, нмМакроМікроМакроМікро340 334 3658095 8250 1500010080 10275 1867516030 16345 2970520000 20390 37060Запуск Реакції зразкомПлюс 25? З або 30? СПлюс 37? СДовжіна Хвилі, нмМакро або мікроМакро або мікро340 334 3658095 8250 1500016030 16345 29705
Таблиця 2.6 Схема проведення АНАЛІЗУ з субстратом
Запуск реації субстратомПлюс 25? З або 30? СПлюс 37? СДовжіна Хвилі, нмМакроМікроМакроМікро134, 92 137,50 250,00168,0 171,25 311,25267,17 272,42 495,08333,33 339,83 617,67 Запуск Реакції зразкомПлюс...
