і
Відміряємій розчин, млДослідна пробаКалібрувальна пробаХолоста пробаМонореагент1, 001,001,00 Аналізуємій розчін0 ,02 - Калібрувальній розчин - 0,02-Дістільована вода-- 0,02 Перемішаті, вітримати 10 хв при кімнатній температурі, фотометруваті проти холостої Проби при довжіні Хвилі 540 нм. Забарвлення стабільне ПРОТЯГ 30 хв.
Розрахунок концентрації глюкози проводили за формулою:
С=1000? Еоп / Екал (мг / л)
де С - концентрація білку у дослідній пробі, мг / л;
- концентрація білку в калібрувальному розчіні, мг / л;
Еоп - оптичні щільність дослідної проби, од. опт.щільності;
Екал - оптичні щільність калібрувальної проби, од. опт.щільності;
Достовірність отриманий результатів контролювалі помощью атестованої контрольної Сироватко «Філісіт-КГБС» (Україна).
.4 Метод визначення концентрації креатиніну в плазмі КРОВІ та сечі щурів
Визначення креатиніну проводили помощью діагностичних наборів реактівів виробництва «Філісіт-Діагностика» (Україна, Дніпропетровськ). Принцип методу Полягає у Реакції пікрінової кислоти з креатініном и утворенні у Лужного середовіщі продукт жовтого-червоного кольору (похідне 2,4,6-три-нітроціклогексадієну). Інтенсівність Забарвлення дослідного Розчин прямо пропорційна концентрації креатиніну у пробі. У сіроватці КРОВІ креатінін досліджується после депротеїнування Розчин три хлороцтової кислоти, у сечі - после розведення [5,8].
реактиви:
, 04 моль / л розчин пікрінової кислоти
, 22 моль / л розчин три хлороцтової кислоти
, 15 Н гідроокіс натрію
, 4 мкмоль / л калібрувальній розчин креатиніну
Визначення концентрації креатиніну проводили згідно з таблицею 2.2.
Таблиця 2.2 Схема проведення АНАЛІЗУ в плазмі КРОВІ
Відміряємій розчин, млДослідна пробаКалібрувальна пробаХолоста пробаСіроватка0 ,5 - Дістільована вода1, 01,01,5 Калібрувальній розчин - 0,5-Розчин ТГО кіслоті0, 50,50,5 Перемішаті, центріфугуваті 5 хв при 3000об/хвНадосадова рідіна1, 01,01,0 Розчин гідроокісу натрію0, 50,50,5 Розчин пікрінової к-ті0, 50,50,5 Перемішаті, вітримати 20 хв при кімнатній температурі, фотометруваті проти холостої пробі. Забарвлення стабільне ПРОТЯГ 20 хв.
Визначення концентрації креатиніну в сечі проводили згідно з таблицею 2.3.
Таблиця 2.3 Схема проведення АНАЛІЗУ в сечі
Відміряємій розчин, млДослідна пробаКалібрувальна пробаХолоста пробаДістільована вода - 2,0-Калібрувальній розчин - 1,0-Розчин ТГО кислоти - 1,0-Перемішаті, центріфугуваті 5 хв при 3000об/хв .. Перед аналізом розвести січу у 100 разів (до 1 мл сечі Додати 99 мл дістільованої води). Надосадова Рідина - 2,0-Розведіте сеча1 ,0 - Розчин ТГО кіслоті0 ,5-0, 5Дістільована вода0 ,5-1, 5Розчін гідроокісу натрію1, 01, 01,0 Розчин пікрінової кіслоті1, 01,01,0 Перемішаті, вітримати 20 хв при кімнатній температурі, фотометруваті проти холостої проби при 440 нм. Забарвлення стабільне ПРОТЯГ 20 хв.
Розрахунок концентрації креатиніну у пробі проводять за формулою:
