25? З або 30? СПлюс 37? СДовжіна Хвилі, нмМакро або мікроМакро або мікро340 334 365134,92 168,0 137,50 171,25 250,00 311,25267,17 333,33 272,42 339,83 495,08 617,67
2.6 Метод визначення актівності гама-глутамілтранспептідазі в гомогенаті та сечі щурів
Визначення актівності гама-глутамілтранспептідазі проводили помощью діагностичних наборів реактівів виробництва «Філісіт-Діагностика» (Україна, Дніпропетровськ).
Принцип методу: під дією гамма-глутамілтранспептідазі глютаміновій Залишок з? L (+)-глутаміл - 4-нітроаніліда переходити на діпептідній акцептор-гліцілгліцін. При цьом вілучається хромоген 4-нітроаналін.
оптичні щільність реакційного Розчин вімірюють после гальмування ферментатівної Реакції оцтова кислота.
реактиви:
. буферних розчин рН (8,0-8,3) 1 флакон з (50 ± 2) мл
гліцілгліцін (0,5 ± 0,005) ммоль / л
тріс (гідроксіметіл) мінометан (0,5 ± 0,05) моль / л
. оцтова кислота 2 флакони по (50 ± 2) мл
. Калібратор
П-нітроанілін (5,4 ± 0,06) ммоль / л 1 ампула (5,1 ± 0,5) мл
. Субстрат наважку або у розчіні (10 ± 0,5) мл 4 мікропробіркі
?-L-глутамілнітроанілід (240 ± 5) 1 флакон
Проведення АНАЛІЗУ проводили за схемою, описаною в табл.2.7.
Таблиця 2.7 Схема проведення АНАЛІЗУ
Відміряті у пробірку, млМакро аналізНапів мікро аналізДослідна пробаХолоста пробаКалібрувальна пробаПроба порівнянняДослідна пробаХолоста пробаКалібрувальна пробаПроба порівнянняРобочій субстрат ний розчін1, 01,01,01,00,50,50,50,5 Інкубують 5 хв при температурі плюс 37? ССіроватка крові0 ,10 - - 0,5 --- Інкубують точно 15 хвилин прітемпературі плюс 37? СКалібратор Розчин оцтової кислоти Сироватка КРОВІ Дістільована вода - 6,00 --- 6,00 0,10 - 0,05 6,00 - 0,05 - 6,00 - 0,1 - 3,00 - 0,05 3 , 00 - 0,025 - 3,00 - 0,05 - 3,00 0,05 0,05
Вітрімують 5 хв при кімнатній температурі.Вімірюють оптичні щільність дослідної Проби Едосл-проти холостої пробі.Оптічну щільність калібрувальної Пробий-проти Проби порівняння.Забарвлення стабільне ПРОТЯГ 30 хв.
Розрахунок результатів:
Розрахунок результатів ведуть за формулою:
С=Едосл / Екал · 3,0 мккат / л
Де С-актівність гамма-глутамілтранспептідазі, мкат / л
,0-фактор Перерахування, мкат / л
Едосл-оптичні щільність дослідної проби, од.оптічної щільності
Екал-оптичні щільність калібрувальної проби, од.опт.щільності
мкмоль (з · л)=мкат / л=60 Мод / л (U / L)=3,6 мкмоль / (рік · мл)
2.7 Статистичнй обробка результатів
Статистичнй Обробка проводили з Використання програми Microsoft Exel з використаних методів математичної статистики, Які розроблено для малих вібірок. Визначавши середнє Арифметичний, як більш вірогідне Значення вімірюваної величина за формулою
де? - знак суми, Хi - результати окрем СПОСТЕРЕЖЕННЯ, n - число варіанту.
З метою кількісної ОЦІНКИ мінлівості розрахову...
