l (II) і R-Sрадікал, два радикала з'єднуються, утворюючи RSSR [53]. У той час як цей процес протікає до деякої міри, коли HS - зв'язується з кобаламина у присутності кисню, описані тут результати показують, що інші реакції призводять до стабільних похідним коричневого кольору, що містять Co (II).
Спектри поглинання похідних показують кілька цікавих особливостей: перша, хоча похідні нагадують Cbl (II) через коричневого кольору з'єднання, вони не мають характерного поглинання для Cbl (II) (? max=311, 472 нм ). Друга, необхідне значення рН для зміни оптичної щільності серосодержащего Cbl-похідного, як і для серосодержащего Cbi-похідного, дорівнює приблизно нулю, яке вказує на те, що Cbl-похідне має base-on структуру і зв'язок діметілбензімідазола з кобальтом дуже стабільна. Третя, в спектрах сірковмісних похідних спостерігається наполеніе глибоких западин, зазвичай спостерігаються в спектрах кобаламинов, але при цьому западини надалі зникають так само і в похідному Cbi з двома групами сульфіду. Це вирівнювання не пов'язане з впливом на зв'язані подвійні зв'язки системи коррінового кільця, так як при додаванні CN - спектр набуває початковий вигляд. Швидше за все це пов'язано з неорганічними сульфідами координовані до кобальту, для порівняння кінцеве поглинання для відновленого ферредоксина, який дуже схожий на дисульфід Cbi, нижче 600 нм [54]. У той час як ЕСП дані показують, що Cbl-похідне має base-on структуру при рН більше нуля, магнітні параметри (табл.3) і відсутність суперсверхтонкого розщеплення (рис.10) вказують на base-off структуру. Немає пояснення настільки явного розбіжності. Якщо припустити, що існує base-on" структура, то атом сірки запобігає звичайні взаємодії вільного електрона з атомом азоту.
Описані спостереження виявляють кілька нових похідних кобаламина, що входять в комплексне рівновагу, повна характеристика яких вимагає значних зусиль. Коричневі HS похідні, по видимому, не мають структуру [Co (II)] - SH, так як їх стабільність, ультрафіолетове і видиме поглинання, а так само і ЕПР спектри не відповідають аналогічним властивостям для тіолових комплексів, [Co (II)] -SR, повідомлених Cockle та ін. [51]. Нижчезгаданих попередні пояснення узгоджуються з висновками (див. Схему на рис.13).
Рис.13. Механізм утворення коричневих похідних та їх взаємодія з CN -.
У ході обговорення нижче, і на малюнку 13, структури являють собою похідні Cbi, але вони можуть бути також застосовані (при необхідності) до похідних Cbl з base-on структурою. Тимчасовий фіолетовий проміжний комплекс спостерігали при рН від 3 до 5, і він є HS - Аддукт, [Co (III)] - HS -. На початковій стадії, коли 5% кобальту - Co (II), другий сигнал при g=2,015, ймовірно, пов'язаний з утворенням HSрадікала, що вказує на присутність [Co (II)] - HS. Реакція Cbi (I) з елементарною сіркою вказує на те, що частинки [Co (I)] - S? існують принаймні тимчасово. Таким чином, на початкових стадіях реакції можливо наступне рівновага: [Co (III)] - HS -? [Co (II)] - HS? [Co (I)] - S? і повільне з'єднання двох радикалів дає димер [Co (II) - SS - [Co (II)]. Запропоновані електронні зрушення аналогічні тим, які відбуваються в гідрид [Co (III)] - H -? [Co (II)] - H? [Co (I)] - H + [55], і в молибденсодержащих гідроксилази, Mo (VI) - S 2 -? Mo (IV) - S? [56]. Структура пропонованого димеру аналогічна структурі гептаметілового ефіру коб (II) іріновой кислоти [Co (II)] - I - [Co (II)] [57]. Структура синього похідного CN-h [Co (II)] - S, отриманого при додаванні CN, має негативний заряд і нестабільна. Результати показують, що синє похідне може бути утворено двома різними способами, шляхом додавання CN - до коричневому серосодержащими похідному і додаванням S 2 - до моноціанокобінаміду при рН 12. Остання реакція дає перші проміжний продукт фіолетового кольору, який, зокрема, перетворюється в синій колір протягом декількох хвилин; фіолетовим проміжним з'єднанням, як вважають, є CN - [Co (III)] - S 2-, яке піддається електронного зрушенню і утворюється синє похідне. Структура, CN - [Co (II)] - S-, є нестабільною і електронний зрушення легко дає CN - [Co (III)] - S 2. Таким чином, синій продукт з реакції CN - з коричневим серосодержащим похідним Cbi став фіолетовим з тією ж швидкістю, що і при взаємодії в розчині з надлишком CN - або при промиванні водою через DEAE-целюлозу. Не були знайдені умови для стабілізації синіх похідних або негативно заряджених фіолетових проміжних сполук, і вони не були витягнуті з DEAE-целюлози і додатково не описані. Оскільки сульфітоCb1 виявлений як природна форма вітаміну в тканинах тварин [58], можливо, що навпаки серосодержащие похідне є природною формою, і що воно перетвориться в сульфітів Cb1 під час процедури вилучення. Рівновага між [Co (III)] - SH і [Co (I)] - S?, Як передбачається, може спостерігатися в організмі бактерій, багато з яких містять велику кіль...
