БОХ ДВО РАН раніше було показано, що КД не проявляє ембріотоксичних і мутагенних властивостей, підвищує неспецифічну стійкість до бактеріальних і вірусних інфекцій в черезвичайно низьких нетоксичних для організму дозах.
Рис. 6. Електронно-мікроскопічна фотографія ТІ-комплексу при співвідношенні компонентів в системі КД: холестерин: МГДГ: порінов.
На наступному етапі досліджень ми оцінили ад'ювантну активність ТІ-комплексів щодо імунної відповіді при імунізації мишей бактеріальним антигеном - суб'едінічнимі білком порінов, виділеним з мембранного поріновие білка Y. рseudotuberculosis. Результати експериментів з імунізації мишей порінов у великому діапазоні доз 0,01-0,1-1-5-10-20-50 мкг/миша дозволили вибрати в якості оптимальної дозу в 10 мкг/миша, яка була використана для імунізації самостійно і в складі різних носіїв. На малюнку 7 показані відмінності у змісті специфічних антіпорінових антитіл в сироватці крові мишей, імунізованих порінов самостійно і в складі різних ад'ювантних комплексів.
Результати даного експерименту дозволяють зробити висновок про те, що імуногенні властивості порінов слабко виражені і при самостійному застосуванні він викликає слабко виражений специфічний гуморальний імунну відповідь, практично не забезпечує протективного ефекту при модельної псевдотуберкулезних інфекції у мишей (дані не представлені). Застосування ТІ-комплексу як носія порінов дозволяє підвищити вираженість цього імунної відповіді, тобто ТІ-комплекс проявляє властивості ад'ювантного носія. Рівень гуморального імунної відповіді підвищується, причому ТІ-комплекси виявляються більш ефективними ад'ювантамі, ніж ПАФ, ТЛ-комплекси, класичні та модифіковані шуканий з порінов. При цьому слід зазначити, що заміна фосфолипида в структурі позовом на гліколіпіди забезпечувала тенденцію до підвищення ад'ювантної активності модифікованого позовом, однак найбільший ефект забезпечувала подвійна заміна фосфолипида і QuillA відповідно на МГДГ і КД, тобто застосування ТІ-комплексу.
Рис. 7. Показники гуморального імунної відповіді мишей при імунізації порінов (в/б) в дозі 10 мкг/миша самостійно і в складі комплексів.
По осі абсцис - експериментальні групи тварин.
По осі ординат - концентрація антіпорінових антитіл в од. ОП при довжині хвилі 492 нм.
У рамках стратегії посилення імуномодулюючих властивостей ад'ювантов ми застосували технологію вбудовування в структуру ад'ювантного носія тималина - препарату тимуса, що володіє широким спектром імунологічної активності.
При застосуванні тималина в якості самостійного ад'юванта в експериментах з імунізації мишей порінов ефект тималина був малозначним. Однак, при цьому таким же виявився і ефект ПАФ, що ще раз підтверджує наш висновок про слабкий імуногенність потенціалі порінов. Ад'ювантний ефект ТІ-комплексу в даному експерименті знову виявився вищим, ніж у класичних і модифікованих позовом, однак включення тималина в шуканий виявилося здатне підняти ад'ювантну активність шуканий до рівнів незначно переважаючих дію ТІ-комплексу.
Результати даного експерименту підтверджують як правильність обраної нами стратегії ускладнення структури матриці ад'ювантного носія шляхом вбудовування в неї іммуноактівних препаратів, так і вибору власне цього препарату. Для оцінки внеску тималина у зміну ад'ювантної активності ТІ-комплексів було проведено наступний експеримент, при якому вбудовування тималина в ТІ-комплекс виробляли одночасно з додаванням порінов (Мал. 7).
Ці результати демонструють здатність тималина потенціювати ад'ювантну активність ТІ-комплексів відносно порінов. Даний ефект спостерігається при всіх випробуваних розведеннях сироватки, підтверджуючи специфічний характер даного ефекту, тобто пов'язаний з підвищенням титрів специфічних антіпорінових антитіл. З огляду на слабкість порінов як антигену і іммуногена ці результати представляються значимими і доводять перспективність продовження досліджень ад'ювантної активності таких конструкцій, як ТІ-комплекси з антигенами.
ВИСНОВКИ
При імунізації тварин слабким по імуногенним властивостям білком - порінов з Y. Pseudotuberculosis - ти- комплекси як носії порінов виявляють властивості ад'ювантного носія. Рівень гуморального імунної відповіді підвищується більш значно, ніж при застосуванні інших ад'ювантних носіїв: ПАФ, класичних шуканий з порінов, модифікованих шуканий - МГДГ і ТЛ-комплексів.
Заміна в матриці шуканий фосфолипида на МГДГ з морських макрофітів дозволяє зберегти суперструктуру і ад'ювантну функцію, характерні для позовом.
Заміна в матриці шуканий одночасно фосфолипида на МГДГ і сапоніну QullA на кукумаріозід призводить до якісної зміни утворених суперструктури - поряд з класичними гексогон...
