ізу в модифікації (Portnyagina et al., 1999). Вимірювання оптичної щільності виробляли на планшетному спектрофотометрі «марка» при довжині хвилі 492 нм. Зміст антіпорінових антитіл виражали в одиницях оптичної густини (ОГ) при довжині хвилі 492 нм.
Статистичну обробку результатів проводили методом параметричного аналізу з використанням критерію t-Стьюдента і медом довірчих інтервалів.
4. РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕННЯ ТА ОБГОВОРЕННЯ
Представлені результати по модифікації ІСКОМной матриці методом заміни її структурних компонентів: фосфолипида і сапоніну QuillA на структури морського походження - гліколіпіди МГДГ і сапонін тритерпеновий глікозид кукумаріозід А2-2 (КД). Показано, що в результаті утворюються структури двох типів: іскомоподобние структури з характерною для них морфологією і розмірами, і тубулярні структури діаметром близько 40 нм. Ці структури названі ТІ-комплексами, характеризуються відсутністю токсичності, характерної для шуканого, здатністю включати амфіфільних білковий антиген і забезпечувати імуноад'ювантну ефект при експериментальній вакцинації.
При проведенні заміни в структурі шуканий фосфолипида на гліколіпіди було застосовано трьох гліколіпіду, виділені методами гель-хромотографии з морської водорості Laminaria japonica - МГДГ, ДГДГ, СХДГ. З цих трьох гликолипидов тільки МГДГ виявився здатним замінити фосфолипид - утворювати структури аналогічним позовом.
Малюнок 5. Комплекс МГДГ - шукана
При імунологічної оцінці таких структур ми не виявили переваг комплексу шуканий-МГДГ в порівнянні з класичними позовом, що відповідає результатам інших авторів, які проводили, наприклад, заміну в матриці шуканий фосфолипида на сфінголіпіди. До того ж, це не вирішувало завдання щодо оптимізації балансу токсичності позовом і їх ад'ювантної ефективності. Для заміни QuillA був застосований ряд глікозидів, отриманих з морських безхребетних (Cucumaria japonica, Stichopos), а також - індивідуальний глікозид женьшеню RH2.
При електронномікроскопіческом дослідженні одержуваних суперструктури, найбільший інтерес викликала заміна фосфолипида на МГДГ, отриманий з морської водорості U.finistrata, і QuillA - на глікозид КД, отриманий з Cucumaria japonica.
Поряд з класичними гексогональний структурами, характерними для шуканого, утворюються тубулярні структури діаметром близько 40 нм і довжиною 150-400нм. Дана комбінація тубулярних і іскомоподобних структур була названа ТІ-комплексом. Слід зазначити, що для утворення таких структур потрібна присутність в комплексі одночасно МГДГ і КД. Якщо заміна фосфолипида на гліколіпіди зберігає гексогональний структуру, характерну для шуканого, то заміна QullA на КД призводить до утворення мережі тубул і ліпосомоподобних везикул - ці структури названі тубулярної-ліпосомальна комплексами (ТЛ-комплекси). Іскомоподобних структур в останньому випадку не виявлялося. Таким чином, для ефективної модифікації ІСКОМной матриці, при якій поряд з іншими структурами зберігається присутність класичних позовом, необхідними виявилися обидва компоненти - гліколіпіди МГДГ і сапонін КД. При детальному аналізі одержуваних структур виявляється цікава закономірність - Тубуль виявляються заповненими іскомоподобнимі структурами, виконуючи таким чином функцію контейнера позовом, можливо, вивільняючи іскомние структури порціями в процесі своєї деградації і сприяючи таким чином пролонгації антигенного подразнення.
Таким чином, застосована техніка модифікації шуканий призводить до утворення принципово нової морфології - ТІ-комплексів, потенційні властивості яких як ад'ювантних носіїв антигенів були прийняті до подальших досліджень.
В якості модельного антигену використовували білок порінов - невеликий амфіфільних мембранний антиген Yersinia pseudotuberculosis з молекулярною масою близько 36 КД. При електронно-мікроскопічному дослідженні встановлено, що процес взаємодії порінов з ТІ-комплексом чи не порушує морфологічну структуру ТІ-комплексу. Зв'язування порінов з ТІ-комплексами відбувається з високою ефективністю - до 95% від вільного білка включається в ТІ-комплекс. Таким чином, виходить препарат порінов, інкорпарірованного в структуру матриці ТІ-комплексу (тобто потенційно вакцинний препарат). При електронній мікроскопії ТІ-комплекси з порінов мають ультромікроскопіческую тубулярну структуру, представлену Тубуль з діаметром поперечного перерізу близько 40 нм, сформованими іскомоподобнимі структурами східного діаметра при наявності останніх всередині та між Тубуль (рис.6).
Випереджаючи оцінку ад'ювантної активності ТІ-комплексів, була проведена серія експериментів з метою аналізу власної ад'ювантної активності структуроутворюючих частинок ТІ-комплексу: КД і МГДГ. Роботами співробітників ТІ...
