d valign=top>
82.195
151.536
325.976
131.493
0
426.007
19.982
3. Результати та їх обговорення
При підготовці ксилеми в першу чергу треба було зупинити всі процеси відбуваються в ній тому фіксували її. Обробка ксилеми включала два основних етапів. Перше - механічне розтирання на млинку для того що б отримає борошно, так як так краще буде видалятися не міцне пов'язані речовини з целюлозою і краще розчинятися. Друге - екстракція пектину і геміцелюлози з хелатирующими і лужними розчинами.
Видалення пектинових речовин з ми здійснили за допомогою оксалату амонію, як відомо пектинові речовини пов'язані між собою іонами Са, а оксалат амонію є хелатуючим речовиною яке зв'язується з іонами Са і пектинові речовини відокремлюються від целюлози. Для видалення оксалату амонію і пектинових речовин з нашої колби ми Центріфугіруем їх 3 рази з водою.
Обробка клітинної стінки ксилеми льону 4% NaOH дозволяла видобувати геміцеллюлозние речовини, що не вилучаються оксалатом амонію, потрібен більш сильний розчин. Ми застосовували 4% NaOH який вивільняє целюлозу від геміцеллюлозних речовин. Потім ми знову видаляли луг і геміцеллюлозние речовини за допомогою методу центрифугування при цьому перевіряли рН універсальної лакмусовим папірцем, промивали до нейтрального.
Витримування у воді В«отчіщенниеВ» ксилеми необхідно для так званої активації, без цього етапу целюлоза не розчиняються. Витримування в ацетоні і ДМА необхідно для повного видалення води, так як при наявність води целюлоза виподает в осад. Клітинну стінку волокна розчиняли в В»8% розчині LiCl в ДМА, і заново облягали целюлозу шляхом додавання води. Осадження у воді необхідно для того що б фермент повністю розщепив целюлозу, якщо опустити цей етап то целюлоза погано буде піддаватися гідролізу. 8% розчин LiCl в ДМА ми використовуємо так як вони разом є хорошими розчинниками целюлози і не реагують з нею, до того від них легко позбутися за допомогою хроматографії. Розчин відокремлювали від целюлози (Фільтрат 1). Целюлозу суспендованих в містить целлюлазу ацетатному буфері. Протягом 1-2 діб фермент розчиняв обложену целюлозу (Фільтрат 2). Ми отримали розчин міцно пов'язаних полісахаридів з целюлозою. Далі з допомогою ТФУ ми руйнуємо всі гликозидні зв'язку і при висушування весь ТФУ випаровується, і залишаються мономери цукрів. Dionex ця іонно-обмінна хроматографія, на ній ми і визначаємо моносахаридний склад, заздалегідь вколюють стандарти моносахоров за якими ми і пізнаємо конкретний моносахаров.
Надалі планується провести ЯМР аналіз і визначити тип сполучних гліканів.
Висновки
1. Відчистили клітинну стінку від пектинових і г...
