м розчином лугу з подальшим гідролізом розчином НС1 для переведення в глюкозу.
навішування досліджуваної матеріалу масою 2 ... 4 г, зважену з похибкою не більше 0,0001 г, слід помістити в центрифужну пробірку, в яку попередньо налити 4 ... 8 см3 30%-го розчину КОН. Пробірку нещільно прикрити скляною пробкою і помістити (для гідролізу матеріалу) в киплячу водяну баню на 3 ч. Через кожні 5 ... 10 хв пробірку струшувати. За закінчення гідролізу (маса стала однорідною) в пробірку додати (при перемішуванні її вмісту скляною паличкою) 10 см3 90%-го спирту і знову помістити її у водяну баню. Коли вміст пробірки почне кипіти, нагрівання припинити. Після охолодження ущільнити випав осад глікогену центрифугуванням і злити рідину, що утворилася над осадом. При випаданні пофарбованого осаду піддати його вторинній обробці 30%-ним розчином КОН (При нагріванні) і осадження спиртом, як описано вище. Виділений осад глікогену промити безпосередньо в центрифужной пробірці спочатку 96%-ним спиртом, а потім ефіром. Після центрифугування обережно злити з осаду спирт і ефір і на невеликий час помістити пробірку на водяну баню для випаровування залишку розчинників.
До осаду глікогену в пробірці слід додати 6 см3 гарячої дистильованої води, а потім нейтралізувати суміш по лакмусу, додаючи до неї спочатку 2 ... 3 краплі концентрованої НС1, а потім 2,2%-ний її розчин. Після нейтралізації в пробірку внести 20 см3 2,2%-го розчину НС1, прикрити її скляною пробкою і помістити на 3 год у киплячу водяну баню для гідролізу глікогену (перетворення його на глюкозу). По закінченні нагрівання вміст пробірки кількісно перенести, змиваючи дистильованою водою, в мірну колбу на 50 см3, нейтралізувати по лакмусу розчином КОН і довести об'єм вмісту, додаючи дистильовану воду, до мітки. Після ретельного перемішування вміст колби відфільтрувати. 5 см3 фільтрату внести у звичайну пробірку розміром 25 х 200 мм і додати 5 см3 окисного реагенту (див. нижче), змиваючи їм зі стінок пробірки краплі досліджуваного розчину. Якщо досліджуваний розчин містить дуже велику кількість глікогену, взяти менше фільтрату (2 ... 3 см3), але обов'язково додати до нього таку кількість дистильованої води, щоб обсяг досліджуваної рідини в пробірці становив 5 см3. Добре перемішавши вміст пробірки, помістити її на 20 хв в сильно киплячу лазню, а потім швидко охолодити водопровідною водою під краном. В охолоджену пробірку обережно (без перемішування) по стінці внести 1 см3 2,5%-го розчину KJ, а потім швидко додати 3 см3 1 н. розчину H 2 SO 2 при енергійному перемішуванні суміші (струшування пробірки) і закрити пробірку пробкою. Через 3 хв відтитрувати виділився йод 0,01 н. розчином тіосульфату натрію (Гіпосульфіту) у присутності крохмалю. Паралельно провести контрольний досвід. Вміст глікогену Х (у%) обчислюється за формулою:
x = (Vv 1 ) * k * 0.25 * 50 * 100/m * v 2 * 1000
де v - об'єм 0,01 н. розчину тіосульфату натрію, який пішов на титрування в контрольному досвіді, см3; v, - обсяг 0,01 н. розчину тіосульфату натрію, який пішов на титрування в робочому досвіді, см3; v 2 - обсяг фільтрату, взятий для обробки окислювальним реагентом, см3; k - коефіцієнт перерахунку на точнo 0,01 н. розчин тіосульфату натрію; 0,25 - кількість (С 6 Н 10 Про 5 ) N , еквівалентное1 см3 0,01 н. розчину тіосульфату натрію, мг; 50 - обсяг всієї рідини в мірній колбі, отриманий після гідролізу осаду (С 6 Н 10 O 5 ), см3; т - маса навішення досліджуваного матеріалу, г; 1000 - перерахунок міліграмів у грами. p> Розбіжність між паралельними визначеннями не повинно перевищувати 0,5%.
Примітка. Для проведення досвіду повинен бути приготований окислювальний реагент - 28 г двузамещенного фосфату натрію (Na 2 HP0 4 ) і 40 г сегнетової солі (калієво-натрієва сіль винної кислоти - KNaC 4 H 4 0 6 • 4Н 2 0); їх слід розчинити в 500 см3 дистильованої води. До отриманого розчину додати 100 см3 1 н. розчину NaOH, долити при помішуванні 80 см3 10%-го розчину сірчанокислої міді (CuSO 4 • 5Н 2 0) і додати 180 г сульфату натрію (Na 2 SO 4 ) . Після розчинення Na 2 SO 4 рідина перенести в мірну колбу на 1000 см3, додати 50 см3 0,1 н. розчину KI і довести об'єм рідини до мітки, додаючи дистильовану воду. Отриманий розчин відстоювати протягом одного-двох днів, відфільтрувати і зберігати в щільно закритій склянці з темного скла. Реактив придатний до вживання при роботі з розчинами глюкози концентрації трохи більше 0,5 мг в 5 см3.
2.4 Визначення вмісту золи
Метод заснований на повному спалюванні органічних речовин, видаленні продуктів їх згорання і визначенні...
