вали буферний розчин, який містив 2,5 г натрійдігідрогенфосфата дигідрату, 1,5 г м-крезолу, 0,6 г фенолу, 16 г гліцерину і 0,2 г натрію хлориду в обсязі 800 мл і довели рН буферного розчину до 7,8, провели стерилізуючу фільтрацію і профільтрували туди суміш кислих розчинів субстанції інсуліну людини, протамінсульфат і цинку хлориду. Отриману суміш витримували при перемішуванні 18 годин при температурі 18 ° С для отримання кристалічної суспензії готового лікарського препарату. Готовий препарат розлили в асептичних умовах у картриджі ємністю 1,5 і 3,0 мл. Готовий препарат проаналізували методом аналітичної високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ). Аналіз показав практичну відсутність інсуліну в супернатанті при загальному вмісті інсуліну 98 МО/мл. Зміст високомолекулярних білків склало 0,2%. Форму і розмір кристалів визначали за допомогою мікроскопа при 400-кратному збільшенні. Кристали мали тетрагональную форму і довжину від 1 до 25 мкм.
Приклад 2
% кристалічної частки лікарської форми готували, як у прикладі 1, за винятком того, що замість натрійдігідрогенфосфата дигідрату брали дінатрійгідрогенфосфат гептагідрат в кількості 2,0 г, а суміш всіх компонентів витримували при перемішуванні при такій же температурі 20 годин. 25% розчинної частини лікарської форми готували наступним чином: 1,19 г субстанції інсуліну людини суспендованих в 100 мл води, за допомогою 1 М НСl довели рН до 3,1. У 230 мл води приготували буферний розчин, який містив 0,66 г дінатрійгідрогенфосфата гептагідрату, 0,5 г м-крезолу, 0,2 г фенолу, 5,28 г гліцерину і 0,066 г натрію хлориду. Буферний розчин змішали з розчином субстанції інсуліну, відкоригували рН отриманого розчину до 7,3 і провели стерилізуючу фільтрацію в ємність з кристалічною частиною готової лікарської форми. Суміш перемішували протягом 1:00 і потім в асептичних умовах провели розлив. Аналіз готового препарату таким же методом, як у прикладі 1, показав загальний вміст інсуліну людини 97,3 МО/мл, вміст інсуліну в супернатанті 24 МО/мл. Зміст високомолекулярних білків склало 0,25%. Кристали мали тетрагональную форму і довжину від 1 до 20 мкм.
Приклад 3
Готовий лікарський засіб отримували, як у прикладі 1, але натрію хлориду брали 0,35 м Загальний вміст інсуліну в медичному препараті, певне методом аналітичної ВЕРХ, склало 98 МО/мл, в супернатанті - 0, 5 МО/мл. Зміст високомолекулярних білків було 0,55%. Форма і розмір кристалів були, як у прикладі 1.
Приклад 4
Готову лікарську форму отримували, як у прикладі 1, але натрію хлориду брали 0,1 м Загальний вміст інсуліну в медичному препараті, певне методом аналітичної ВЕРХ, склало 96,8 МО/мл, в супернатанті -0,8 МО/мл. Зміст високомолекулярних білків становило 0,6%. Форма і розмір кристалів були, як у прикладі 1.
Для визначення хімічної і фізичної стабільності отримані зразки медичних препаратів, які на момент приготування відповідали всім вимогам, що пред'являються до препаратів інсуліну Європейської фармакопеї, витримувалися при температурі +4 ° С протягом 25 місяців. Після цього зразки були проаналізовані аналітичною системою ВЕРХ на утримання високомолекулярних сполук (ВМС). Зовнішній вигляд суспензії визначався візуально. Отримані дані зведені в таблицю, представлену вище.
Таким чином, як видно з наведених прикладів і таблиці, хімічна та фізична стабільність отриманих відповідно до винаходом зразків готових лікарських форм інсуліну людини пролонгованої дії (приклади 1 і 2) більш ніж в три рази перевищує дані, які потрібні Європейської фармакопеї, а їх склад дозволяє скоротити виробничий процес більш ніж у сім разів.
Готова лікарська форма інсуліну людини пролонгованої дії, що містить високоочищену субстанцію інсуліну людини, протамінсульфат, цинку хлорид, гліцерин, м-крезол, фенол і воду, що відрізняється тим, що високоочищена субстанція інсуліну людини має залишкову протеолітичну активність не більше 0,005 адсорбційних одиниць, а композиція містить натрійдігідрогенфосфат дигідрат або дінатрійгідрогенфосфат гептагідрат і додатково натрій хлорид і має рН 6,9-7,8 при наступному співвідношенні компонентів, г/л:
високоочищена субстанція інсуліну людини 3,214-3,928
протамінсульфат 0,238-0,318
цинку хлорид 0,014-0,0225
гліцерин 14-18
м-крезол 1,4-1,6
фенол 0,5-0,7
натрійдігідрогенфосфат дигідрат 2,4-2,8
або дінатрійгідрогенфосфат гептагідрат 2,0-2,3
натрію хлорид 0,15-0,3
вода. [17, стр.71-77]
. 2 Ін'єкційні форми аналогів інсуліну та його кон'югатів
